hrvatski

Izražaj i lokalizacija glikosfingolipida u primarnim i sekundarnim limfatičnim organima miša

Istraživanja izražaja neutralnih GSL i gangliozida u normalnim limfatičnim tkivima i stanicama miša dosad su uglavnom izvođena biokemijskom i imunokemijskom analizom izdvojenih i pročišćenih GSL razdvojenih tankoslojnom kromatografijom. Kako bi istražili raspodjelu globotriaozil-ceramida (Gb3Cer), globozida (Gb4Cer), gangliotriaozil-ceramida (Gg3Cer), gangliotetraozil-ceramida (Gg4Cer) i gangliozida GM3 i GalNAc-GM1b u mišjem timusu, slezeni i limfnom čvoru, rabili smo specifična poliklonalna protutijela za imunohistološku, protočno citometrijsku i Western blot analizu. Nezreli timociti izražavali su GSL biljege koje su prepoznala sva navedena protutijela osim Gb4Cer protutijela. Zreli timociti obilježeni su protutijelima na GalNAcGM1b, Gg4Cer i Gb4Cer. U sekundarnim limfatičnim organima, protutijela na globo-seriju neutralnih GSL obilježila su sinusoidne i vaskularne prostore, dok su protutijela na ganglio-seriju neutralnih GSL obilježila i područja koja sadržavaju limfocite. U Western blot analizi, samo se protutijelo protiv GalNAcGM1b gangliozida vezalo na specifičnu proteinsku vrpcu u sva tri ispitivana tkiva. Analiza limfocita iz sekundarnih limfatičnih organa protočnim citometrom pokazala je da limfociti B nose epitope koje prepoznaju sva navedena protutijela, dok je T-stanični izražaj GSL bio većinom usmjeren k ganglio-seriji neutralnih GSL i gangliozida tipa GM1b. Rezultati imunohistološke analize tkiva i analize stanica protočnim citometrom nisu se uvijek podudarali, vjerojatno zbog križne reaktivnosti GSL protutijela s glikoproteinski vezanim oligosaharidnim lancima i/ili zbog razlika u ugljikohidratnim profilima izoliranih stanica i stanica u tkivnom mikrookolišu. Stoga samo usporednim korištenjem biokemijskih metoda zajedno s imunohistološkom analizom i protočnom citometrijom može dati uvid u složenu tkivnu i staničnu raspodjelu GSL in vivo.

glikosfingolipidi; imunohistologija; in vivo; limfni čvor; miš; protočna citometrija; slezena; timus

nije evidentirano