hrvatski

Kvantitativna i kvalitativna analiza fenolnih tvari u vrsti Arabidopsis thaliana

Istraživanja rađena na vrsti Arabidopsis thaliana objavljena su dosad u više od 20000 radova, no samo se u malom broju radova istražuju fenolne tvari prisutne u listovima. One imaju važnu ulogu u brojnim biološkim procesima uključujući obrambeni odgovor biljke. Proveli smo opsežno istraživanje kako bi utvrdili utjecaj različitih otapala (H2O, 50% i 80% metanol) ; temperature (4°C, RT, 80°C) ; vremena (30 min, 2h i 16h) i hidrolize na uspješnost ekstrakcije fenolnih tvari iz listova A. thaliana Columbia-0. Analiza dobivenih ekstrakata provedena je spektrofotometrijski i pomoću tekućinske kromatografije visoke moći razlučivanja (HPLC). U tu svrhu razvijena je metoda kojom možemo uspješno razdvojiti 23 spoja uobičajena u biljnom svijetu. Uzorci su razdvajani na Zorbax Rx-C18 koloni (75x4, 6mm, 5μ m, Agilent Technologies) koristeći segmentirani gradijent 0-100%B u 4 min, 100%B do 100%C u narednih 19 min te 100%C do 100%D u sljedeće 4 min pri temperaturi 35°C i protoku 1 ml/min (A=0, 05% TFA (trifluoroctena kiselina) ; B=20% metanol, 0, 05% TFA ; C=70% metanol, 0, 05 TFA ; D=100% metanol). Naši rezultati ukazuju na veći broj i veće relativne količine detektiranih tvari kod hidroliziranih uzoraka. Duljim vremenom ekstrakcije u pravilu se povećava sadržaj fenolnih tvari, dok u odnosu na temperaturu taj broj i količina ovise o strukturi ekstrahiranih tvari. Opisane metode omogućuju analizu širokog spektra fenolnih tvari koje će se koristiti u našim istraživanjima interakcije biljke i patogena.

fenolne tvari; sekundarni metaboliti; ekstrakcija; HPLC; flavonoidi

nije evidentirano