hrvatski

Mutacije virusa hepatitisa C u hipervarijabilnoj regiji 1 i razvoj kvazispecijesa u bolesnika s kroničnim hepatitisom C

UVOD: Klinička značajnost HCV kvazispecijesa nije razjašnjena. Dostupne metode određivanja kvazispecijesa sekvencioniranjem tehnički su zahtjevne i skupe. ----- CILJ I METODE: osnovni cilj bio je detekcija HCV kvazispecijesa. Uzorci 109 ispitanika primarno su genotipizirani standardnom INNO-LIPA HCV II metodom. Nakon toga isti uzorci su analizirani metodom taljenja DNK: RNK je izolirana komercijalnim kitovima a potom prepisana lančanom reakcijom polimeraze. Amplifikacija hipervarijabilne regije 1 rađena je u 2 faze a dobivena mješavina analizirana je u Light- cycleru. U njemu je visokom rezolucijom detektirana fluorescencija uzorka. Rezultat analize predstavlja krivulja taljenja označena s 4 parametra: temperatura taljenja 50% uzorka DNK (Tm), širina (W), visina (H) i površina (A). Svaki parametar statistički je obrađen na sposobnost predikcije terapijskog učinka. Dinamičke promjene analizirane su u parnom uzorku koji je dobiven u 40 neliječenih ispitanika te u 24 liječena ispitanika (45/69 imalo je ETVR). ----- REZULTATI: uključeno je 109 ispitanika, dobi 18-71 godinu, više muškaraca (64), najveći broj genotipa 1 (59, 6%), većina srednjeg stadija po Ishaku (fibroza 3 i 4 u 53, 8%). Parametri kvazispecijesa jesu: srednja Tm1 86.8± ; 2.10 ; srednja H1 1.64± ; 0.74 ; srednja W1 3.38± ; 0.14 a medijan A1 iznosi 4.42. Nije nađena statistički značajna korelacija parametara s genotipom, viremijom ili fibrozom. Tm1, H1 i A1 u pozitivnom su odnosu s ETVR i SVR dok je odnos s W1 obrnuto proporcionalan. Statistička značajnost za SVR utvrđena je za A1 (OR=1.44, 95%CI=1.03-2.03, p 0.033). U odnosu bazalnog i parnog uzorka postoji pomak raspona u svim parametrima: u neliječenoj grupi porasla je Tm2, W2 i H2, dok se A2 smanjila. U liječenoj grupi Tm2 je porasla, dok su se H2 i A2 smanjile. Statistička značajnost dobivena je za W2 (Wilcoxon Signed Ranks -1, 871 ; p = 0, 061). - ---- ZAKLJUČAK: prediktivnu vrijednost za terapijski odgovor ima površina kvazispecijesa. Tijekom vremena zamijećene su promjene parametara kvazispecijesa u neliječenoj i liječenoj grupi.

hepatitis C ; kvazispecijesi ; hipervarijabilna regija 1 ; taljenje DNK visokom rezolucijom

nije evidentirano