hrvatski

Učinak 5-azacitidina na rast ektoplacentalnog stošca i proliferacijsku sposobnost decidua stanica štakora

Trofoblast ektoplacentalnog konusa i decidua stanice zajedno čine najveći dio buduće posteljice u glodavaca. Primjenom teratogena 5-azacitidina (5azaC) u kritičnim fazama razvoja embrionalnih strukura utjecali smo na rast i proliferaciju ovih ekstraembrionalnih dijelova deciduoma. 5azaC intraperitonealno je injiciran (5mg/kg) skotnim ženkama 2. dana gestacije (1. eksp. skupina) ili 5. dana gestacije (2. eksp. skupina) ili 8. dana gestacije (3.eksp skupina) dok su netretirane ženke služile kao kontrola. Devetog dana gestacije (0 dan nalaz vag. čepa) ženke su žrtvovane i izolirani su deciduomi sa zametkom. Kako bi se utvrdilo postoje li razlike u rastu konusa nakon primjene 5azaC (2. i 8. dana) oni su uzgajani &#8220; in vitro&#8221; u inkubatoru kroz tri dana (5% C02 i 95% zraka na 370C) te su četvrti dan fiksirani, a prethodno je izmjeren promjer pomoću okularnog mikrometra. Rast konusa &#8220; in vivo&#8221; proučen je njihovom transplantacijom pod bubrežnu čahuru štakora kroz 6 tjedana. Proliferacijska sposobnost decidua stanica testirana je imunohistokemijskom metodom pomoću proliferacijskih markera PCNA i Ki67, a prvi je kvantificiran pomoću stereološke varijable numeričke gustoće. 5azaC primijenjen 8. dana gestacije povećao je rast konusa u kulturi, dok je njegova transplantacija pokazivala najmanje znakove infiltracije koja je rezultirala stvaranjem vezivnog tkiva te jakom limfocitnom infiltracijom. Konusi tretirani 5azaC 5. dana gestacije i transplantirani pod bubrežnu čahuru, daleko su najviše narušili građu bubrega dok su kontrole po invazivnosti bile između ove dvije analizirane eksperimentalne skupine. Proliferacija decidua stanica statistički je značajno veća u eksperimentalnim skupinama u usporedbi sa kontrolom, a u prvoj eksperimentalnoj skupini (5. dan primjene 5azaC) bila je veća nego u drugoj (8. dan primjene 5azaC) (p<0.05 ; Student&#8217; s t-test). Dobiveni rezultati ukazuju da je periimplantacijsko i perigastrulacijsko razdoblje, za koje se zna da je kritično za razvoj zametka, također ključno i za razvoj ekstraembrionalnih strukutra iz kojih će se razviti posteljica pa teratogeni poput 5azaC mogu najviše utjecati na njihov razvoj.

metilacija DNA; 5-azacitidin; PCNA; ektoplacentalni stožac; decidua

nije evidentirano