hrvatski

Utjecaj mutacija na dodirnoj površini podjedinica na kinetičke i dinamičke karakteristike alkalne fosfataze kod E. coli

Alkalna fosfataza (AP, E.C. 3.1.3.1) je nespecifična fosfomonoesteraza koja katalizira hidrolizu velikog broja fosfomonoestera. AP pokazuje odstupanja od Michaleis-Menten kinetike koja se mogu objasniti modelom dimernog enzima s nejednakim podjedinicama. Predloženi model opisuje mehanizam hidrolize supstrata uslijed konformacijskih promjena na dodirnoj površini podjedinica. Značaj dodirne površine podjedinica i β -nabrane ploče koja se proteže ispod aktivnog mjesta do površine podjedinice, ispitana je metodom usmjerene mutageneze kojom su dobiveni mutantni enzimi s jednom (T81A), odnosno dvije (T81A/Q83L) mutacije. Mutirane aminokiseline Thr-81 i Gln-83 smještene su u β -nabranoj ploči koja se nalazi na dodirnoj površini između susjednih podjedinica. Mutirani enzimi su pročišćeni i uspoređeni sa divljim tipom AP. Analizirani su kinetički parametari te su ispitana dinamička svojstva enzima mjerenjem fosforescencije pri sobnoj temperaturi. Kinetičke karakteristike ispitivane su u 1 M Tris/HCl, pH 8, te u 0, 35 M 2A2M1P, pH 10, 5 puferu. Mutacije na dodirnoj površini podjedinica, utjecale su na strukturnu stabilnost proteina i na njegove kinetičke karakteristike, ukazujući na važnost interakcije dodirnih površina na katalitički mehanizam.

alkalna fosfataza; kinetika

nije evidentirano

engleski

Influence of mutations at the subunit interface on kinetic and dynamic properties of alkaline phosphatise from E. coli

Alkalna fosfataza (AP, E.C. 3.1.3.1) je nespecifična fosfomonoesteraza koja katalizira hidrolizu velikog broja fosfomonoestera. AP pokazuje odstupanja od Michaleis-Menten kinetike koja se mogu objasniti modelom dimernog enzima s nejednakim podjedinicama. Predloženi model opisuje mehanizam hidrolize supstrata uslijed konformacijskih promjena na dodirnoj površini podjedinica. Značaj dodirne površine podjedinica i β -nabrane ploče koja se proteže ispod aktivnog mjesta do površine podjedinice, ispitana je metodom usmjerene mutageneze kojom su dobiveni mutantni enzimi s jednom (T81A), odnosno dvije (T81A/Q83L) mutacije. Mutirane aminokiseline Thr-81 i Gln-83 smještene su u β -nabranoj ploči koja se nalazi na dodirnoj površini između susjednih podjedinica. Mutirani enzimi su pročišćeni i uspoređeni sa divljim tipom AP. Analizirani su kinetički parametari te su ispitana dinamička svojstva enzima mjerenjem fosforescencije pri sobnoj temperaturi. Kinetičke karakteristike ispitivane su u 1 M Tris/HCl, pH 8, te u 0, 35 M 2A2M1P, pH 10, 5 puferu. Mutacije na dodirnoj površini podjedinica, utjecale su na strukturnu stabilnost proteina i na njegove kinetičke karakteristike, ukazujući na važnost interakcije dodirnih površina na katalitički mehanizam.

alkaline phosphatase; kinetics

nije evidentirano