Kompleks aminoacil-tRNA-sintetaza u metanogenim arhejama (CROSBI ID 544682)
Prilog sa skupa u zborniku | sažetak izlaganja sa skupa
Podaci o odgovornosti
Godinić Mikulčić, Vlatka ; Jarić, Jelena ; Ibba, Michael, Weygand-Đurašević Ivana
hrvatski
Kompleks aminoacil-tRNA-sintetaza u metanogenim arhejama
Neke od aminoacil-tRNA-sintetaza organizirane su u složene multi-sintetazne komplekse. Budući da su ovi enzimi uključeni u niz dodatnih funkcija u stanici osim prijenosa genetičke informacije, izuzetno je važno pronaći poveznice između aminoacil-tRNA-sintetaza i ostalih staničnih proteina. Osobit izazov bio je pronalazak proteinskih partnera seril-tRNA-sintetaze (SerRS) u metanogenoj anaerobnoj arheji Methanothermobacter thermautotrophicus pomoću sustava dvaju hibrida u kvascu. Od identificiranih proteinskih pozitiva, pobliže smo istražili neobičnu interakciju s arginil-tRNA-sintetazom (ArgRS). Asocijacija proteina potvrđena je nativnom elektroforezom u gelu te gel-filtracijom. Ustanovljeno je da se kompleks sastoji od homodimera SerRS i monomera ArgRS. Upotrebom tehnike SPR (engl. Surface Plasmon Resonance) određena je konstanta disocijacije koja je u skladu s afinitetima u drugim arhealnim multi-sintetaznim kompleksima. Interakcija dvaju proteina biološki je značajna jer nakon dodatka ArgRS seril-tRNA-sintetazi dolazi do stimulacije serilacije. Dosad nije pronađen proteinski partner arhealnih SerRS i općenito se SerRS ne nalazi ni u jednom dosad poznatom multi-sintetaznom kompleksu. Donedavno se mislilo da se asocijacija sinetaza uglavnom zbiva u eukariotima, međutim interakcija SerRS i ArgRS u arhejama ukazuje na potrebu za udruživanjem sintetaza u veće komplekse i u arhejama kako bi se pospješila translacija i usmjereni prijenos supstrata.
seril-tRNA-sintetaza; multi-sintetazni kompleksi; sustav dvaju hibrida; protein-protein interakcije
Several aminoacyl-tRNA synthetases (aaRS) are found in multi-synthetase complexes (MSC) so identification of the networks that connect possible regulatory non-synthetase proteins to synthetases or synthetases to each other and to the cellular processes they affect is a critical need. We now attempted to delineate protein partners of seryl-tRNA synthetase (SerRS) in methanogenic archaea with yeast two-hybrid screen that facilitates construction of protein– protein linkage maps. We found that the M. thermautrophicus arginyl-tRNA synthetase (ArgRS) interacts directly with SerRS ; native electrophoretic mobility shift assays and gel-filtration confirmed the protein association in vitro with probable stoichiometry of one dimeric SerRS per ArgRS monomer. Further, we characterized the binding affinity of SerRS to ArgRS by surface plasmon resonance and dissociation constant was defined. Moreover, interaction of SerRS with ArgRS improves the activity of SerRS two-fold while the presence of SerRS did not lead to significant enhancement of ArgRS activity. Interestingly, SerRS has never been found associated to another synthetase or within the MSC. This type of structural organization wa
engleski
Aminoacyl-tRNA synthetase complex in methanogenic archaea
nije evidentirano
seryl-tRNA synthetase; multi-synthetase complexes; yeast two-hybrid; protein-protein interactions
nije evidentirano
Podaci o prilogu
35-35.
2008.
objavljeno
Podaci o matičnoj publikaciji
50 godina molekularne biologije u Hrvatskoj
Zahradka, Ksenija ; Plohl, Miroslav ; Ambriović-Ristov, Andreja
Zagreb: Institut Ruđer Bošković
978-953-6690-78-7
Podaci o skupu
50 godina molekularne biologije u Hrvatskoj
poster
15.10.2008-18.10.2008
Zagreb, Hrvatska