hrvatski

Strukturna analiza gena nm23-SD1 i biokemijska karakterizacija proteina Nm23-SD1 iz morske spužve Suberites domuncula

Nukleozid difosfatske kinaze, Nm23/NDPK, evolucijski su sačuvane kroz sve tri domene života. Ljudski gen nm23-H1/NDPK A prvi je opisani supresor metastaziranja. Spužve (Porifera) najstarije su i najjednostavnije koljeno višestaničnih životinja – Metazoa. Konstruirana je baza podataka EST-ova (expressed sequence tags) iz spužve S. domucula nasumičnim sekvenciranjem cDNA. Analizirali smo protein NDPK/Nm23 iz spužve Suberites domuncula. Spužvin protein pokazuje najveću sličnost s ljudskim proteinom Nm23-H1 te je nazvan Nm23-SD1. Cilj ovog istraživanja karakterizacija je spužvinog gena/proteina Nm23-SD1. Nadalje, s obzirom da je poznato da smanjenje ekspresije ljudskog Nm23-H1 uzrokuje pojačan metastatski potencijal nekih stanica (npr. MDA-MB-231T, karcinom dojke) cilj je našeg istraživanja ispitati može li spužvin homolog zamijeniti ljudski Nm23-H1 te smanjiti metastatski potencijal ovih stanica u kulturi. Strukturna analiza spužvinog gena nm23-SD1 pokazala je tri intronske regije, od kojih su prve dvije na istim pozicijama kao i one u ljudskom genu. cDNA koja kodira protein Nm23-SD1 klonirana je i prekomjerno eksprimirana u vektoru pET15b u E. coli. Pročišćeni protein pokazuje aktivnost nespecifičnog vezanja na DNA i sličnu kinaznu aktvnost i uglavnom je u heksamernoj formi kao i ljudski homolog. Preliminarni rezultati ukazuju da protein Nm23-SD1 ima sličnu staničnu lokalizaciju kao i Nm23-H1. Istraživanja stabilnih klonova sa spužvinim Nm23-SD1 su u tijeku.

spužva; nm23; Porifera

nije evidentirano