hrvatski

Inhibicija EcoKI restrikcije u bakteriji Escherichia coli: Uloga enzima RecBCD

Nemodificirani bakteriofag lambda se zasađuje s vrlo niskom učinkovitošću zasađivanja na bakteriji Escherichia coli K-12. To je posljedica cijepanja nemodificirane DNA faga lambda restrikcijskom endonukleazom EcoKI. Fragmenti nastali restrikcijom dalje se razgrađuju enzimom RecBCD. Međutim, enzim RecBCD osim u razgradnji DNA može sudjelovati i u inhibiciji restrikcije. U bakteriji E. coli K-12 otkrivena su tri tipa inhibicije restrikcije povezana s enzimom RecBCD. To su UV-inducirana, Gam-posredovana i plazmidom posredovana inhibicija restrikcije. U ovom radu pokazano je da za UV-induciranu inhibiciju restrikcije u bakteriji E. coli nije potrebna podjedinica RecD enzima RecBCD, te da je helikazna aktivnost sadržana u kompleksu RecBC odgovorna za UV-induciranu inhibiciju restrikcije ( za praćenje razine restrikcije bakterije su inficirane nemodofocoranim fagom lambda, a učinkovitost zasađivanja je obrnuto proprocionalna aktivnosti enzima EcoKI). Također je in vivo pokazano, da suprotno očekivanju, krnji kompleks RecB1-929CD bez nukleaznog centra ne može dovesti do povećane rezistencije na UV zračenje i do UV-inducirane inhibicije restrikcije u recB mutantu. Nadalje, pokazano je da krnja podjedinica RecB1-929 zadržava sposobnost vezanja Gam proteina faga lambda, te da se protein Gam veže na N-terminalni kraj podjedinice RecB. UV zračenje izaziva dodatnu inhibiciju restrikcije u bakterijama u kojima dolazi do Gam-posredovane ili plazmidom-posredovane inhibicije restrikcije. To pokazuje da se radi o različitim mehanizmima inhibicije restrikcije.

Escherichia coli; EcoKI; RecBCD; bakteriofag lambda; inhibicija restrikcije

nije evidentirano