hrvatski

Kultura ljudskih keratinocita in vitro

Epidermalne stanice, keratinociti, mogu se kultivirati in vitro u definiranom mediju za keratinocite bez seruma (DKSFM) ili na hranilišnom sloju letalno ozračenih mišjih fibroblasta stanične linije 3T3-J2. Organotipična kultura kože je dvoslojni sustav, sastoji se od keratinocita zasijanih na dermalnom ekvivalentu koji sadrži autologne fibroblaste. Opisane su kulture ljudskih keratinocita izoliranih iz ljudskih prepucija dobivenih rutinskim cirkumcizijama. Keratinociti su izolirani tripsinskom razgradnjom epidermisa koji je razdvojen od dermisa enzimatskom razgradnjom u dispazi. Primarni keratinociti u DKSF mediju zasijani su u 25 cm2 boce za kulturu tkiva koje su inkubirane na 37 °C uz 5% CO2. Kulture su hranjene svježim medijem svaka 2 dana do dostizanja 60-70% konfluencije četrnaesti do dvadeseti dan nakon izolacije. Primarne kulture su tripsinizirane, a dobiveni keratinociti su smrznuti u tekućem dušiku ili zasijani u sekundarne kulture radi daljnje ekspanzije. Primarni i sekundarni keratinociti su citocentrifugirani za imunocitološki pregled. Keratinocitna proliferacija određivana je kolorimetrijski bojom WST-1 u ploči s 96 bunarića. DNA ekstrahirana iz keratinocita pokazala je prisutnost gena CD10 metodom PCR. Uloga membranske metaloendopeptidaze CD10 i njenih supstrata u proliferaciji i diferencijaciji keratinocita je svrha naših istraživanja.

kožne stanice; stanična kultura; CD10 (neprilizin)

nije evidentirano