engleski

Changes in expression of proliferative cell nuclear antigen and membrane proteins in rat placenta treated with 5-azacytidine

Metilacija DNA kao važan mehanizam regulacije ekspresije gena tijekom embrionalnog razvoja može biti promijenjena demetilacijskim agensom 5- azacitidinom (5azaC). Tako uzrokovana demetilacija DNA mogla bi utjecati na proliferacijsku sposobnost stanica trofoblasta za vrijeme placentacije kao i na sastav membranskih proteina. Jednokratna doza 5azaC (5 mg/kg) injicirana je intraperitonealno skotnim ženkama od 4. do 15. dana gestacije. Životinje su žrtvovane 20. dana gestacije, a posteljice pripremljene za imunohistokemijsku analizu na nuklearni antigen proliferirajućih stanica (PCNA). Analizirala se stereološka varijabla numeričke gustoće (Nv) pomoću Weiblovog mnogonamjenskog sustava s 42 testne točke. Membranski proteini razdvojeni su SDS-elektroforezom u poliakrilamidnom gelu te identificirani Western blot metodom pomoću lektina SNA i UEA-I. Primjena 5azaC u periimplantacijskom razdoblju izazvala je izostanak razvoja funkcionalno najvažnijeg dijela posteljice – labirinta, dok je proliferacijska aktivnost stanica trofoblasta bila statistički značajno veća u odnosu na kontrolu (P<0, 01). Isti agens apliciran u perigastrulacijskom razdoblju potpuno je narušio strukturu posteljica, dok su PCNA- pozitivne stanice mogle biti identificirane samo 8. dana gestacije, ali su bile statistički značajno manje zastupljene nego u kontroli (P<0, 01). Usporedba glikozilacijskih obrazaca membranskih proteina u ovom razdoblju pokazala je razlike među promatranim skupinama. GP50 bio je postojano eksprimiran tijekom navedenih dana isključivo u tretiranim posteljicama. Posljednje promatrano razdoblje primjene 5azaC odgovaralo je fazi organogeneze u plodu, a karakterizira ga ponovna uspostava strukture posteljice s jasnom granicom labirinta i bazalnog sloja. 11. i 12. dana bazalni sloj još je uvijek pokazivao neprimjereno velik udio u odnosu na labirint, dok je proliferacija stanica trofoblasta bila manja nego u kontrolnim posteljicama (P<0, 01). 13., 14. i 15. dan primjene 5azaC dovodi do povratka prirodnog odnosa labirinta i bazalnog sloja, ali je broj PCNA-pozitivnih stanica statistički značajno veći u odnosu na kontrolu (P<0, 01). Dosada nepoznate promjene proliferacijske sposobnosti stanica trofoblasta i membranskih proteina placente nakon primjene 5-azaC daljnji su dokaz važnosti epigenetske regulacije razvoja.

DNA methylation; 5-azacytidine; PCNA; placenta; glycoproteins

nije evidentirano