hrvatski

REZANJE TKIVA KRIOSTATOM

REZANJE TKIVA KRIOSTATOM Potrebna oprema i pribor: kriostat, ljepilo za tkivo, fini kistovi, britvice (npr. Disposabale Microtome Blades, Leica, model 818 ili Microtome Blade, Feather, R35), silanizirana stakla, pamučne rukavice. 1. Uključiti kriostat nekoliko sati prije (ukoliko se uređaj gasi) te podesiti temperaturu rezanja u komorici (ovisi o vrsti tkiva, uobičajena temperatura: -20° C). U komoricu postaviti NOŽ (noviji uređaji imaju nosač sa britvicama) i sav potreban pribor (osim ljepila i stakala) kako bi se ohladio usporedno s komoricom. 2. Preporučuje se rezati SVJEŽI uzorak tkiva. Preporučuje se da dimenzije tkiva ne budu veće od 3 mm2. Ukoliko ne možete rezati dotično tkivo odmah, pohranite ga u hladnjak na -80° C. Nakon pohrane, tkivo treba dovesti do temperature rezanja. Ona ovisi o vrsti tkiva. 3. Na nosač staviti kapljicu ljepila za tkivo (npr. Tissue Freezing Medium Jung, order number 0201 06926) 4. Uroniti tkivo u kapljicu. Nadopuniti ljepilo da prekrije u potpunosti komadić tkiva. Paziti da nema mjehurića. 5. Nosač sa tkivom prebaciti do komorice za rezanje. 6. Kad ljepilo oko tkiva pobijeli (nakon cca. 30 min.) tkivo je spremno za rezanje. 7. Nosač sa tkivom staviti u držač bloka. Podesiti debljinu reza (prosječna debljina je 10 &micro ; ; ; m, a raspon od 1-60 &micro ; ; ; m). 8. Približiti blok nožu (noviji uređaji imaju motorizirano pomicanje držača tkiva koje može biti grubo i fino). 9. Odstraniti suvišak ljepila koje okružuje tkivo odzgora okretanjem ručice. Ručica je obično spojena s glavom držača bloka (princip rotacijskog mikrotoma). Okretanjem ručice blok se približava nožu te se odstranjuje suvišak ljepila. 10. Rezati tkivo okretanjem ručice. Rezovi se rasprostiru po metalnoj pločici pomoću hladnog kista. Moguće je iznad pločice položiti zaštitno staklo (koje se mora zasebno namjestiti i prilagoditi nožu). Time se postiže da rezovi ulaze između stakla i metalne pločice i ravnaju se. Ovisno o potrebama, može se načiniti odmah nekoliko rezova koji se postavljaju na silanizirana predmetna stakla. Stakla držimo do trenutka postavljanja rezova na sobnoj temperaturi. 11. Postavljanje rezova na predmetno staklo. Predmetno staklo se postavi na rez/rezove i lagano prisloni. Rez ili više njih prianjaju na toplo staklo. Predmetno staklo potom okrenemo tako da nam rez gleda prema gore. Rezove ostavimo u komorici dok ne pobijele. U tom trenutku su spermni za bojanje ili ih možemo pohraniti na – 20 °C. U slučaju pohranjivanja, preporučuje se da se rezovi zaštite i omotaju alu-folijom.

tkivo, kriorezovi, kriostat

nije evidentirano