hrvatski

Određivanje proteinaza trichomonas-a tenax-a

U radu smo demonstrirali karakteristike proteolitičkih sustava protozoona Trichomonas tenax, uzgojenih iz zubnog plaka i korijenskih kanala zubi s gangrenoznom pulpom ili periapeksnim procesom. Uzorci su nasađeni na modificirani Diamondov tekući hranjivi medij i očitavani svjetlosnom mikroskopijom svježeg preparata svakih 24 sata do petog dana nakon nasađivanja. Izolati su smrznuti na –20oC do pripreme staničnih lizata. Lizati ispranih stanica su pripremljeni dodavanjem 0.25% (v/v) TRITON X- 100 suspenziji parazita u 0.25 M sukrozi. Lizati su odmah korišteni ili pohranjivani na –20oC. Nativnom elektroforezom na poliakrilamidnom gelu utvrđene su četiri proteinske trake kod obiju vrsti izolata oralnog trihomonasa, a elektroforezom na poliakrilamidnom gelu uz natrijev dodecil sulfat i uz dodatak želatine utvrđena je za obje vrste izolata multipla proteolitička aktivnost najviše izražena u području proteina molekulske težine 36 kDa i kod inkubiranja gela u pH 4.6 i pH 5.6. Komparativna proteolitička aktivnost lizata ispitana je na supstratima ; azokazeinu i peptidima nitroanilida. U staničnim lizatima oba izolata oralnog trihomonasa opažene su tri proteolitičke aktivnosti: AZCaza, aktivnost na azokazeinu ovisna o ditiotreitolu ; te dvije različite aktivnosti na peptidima nitroanilidskih derivata (jedna optimalna kod pH 7.0 i stimulirana ditiotreitolom ; i druga optimalna kod pH 5.0 i neovisna o ditiotreitolu). AZCaza aktivnost je bila očigledna u širokom pH rasponu. S obzirom na komparativnu proteolitičku aktivnost prema navedenim supstratima, izolati protozoona Trichomonas tenax pokazuju podjednaku aktivnost i pripadaju cistein proteinazama. Iako žive u različitim mikrosredinama usne šupljine, oba izolata protozoona Trichomonas tenax pokazuju sličnu proteolitičku aktivnost.

Trichomonas tenax ; proteolitička aktivnost

nije evidentirano