hrvatski

Izdvajanje DNA kromatografijom

U ovom će poglavlju biti opisana kromatografska metoda izdvajanja plazmidne DNA, te humane i bakterijske genomske DNA korištenjem kratkih monolitnih nosača CIM® ; s dietilaminoetilnom (DEAE) aktivnom skupinom. Princip vezanja nukleinskih kiselina na ionski izmjenjivač sastoji se u vezanju negativno nabijene fosfodiesterske veze nukleinske kiseline na pozitivno nabijeni ligand izmjenjivača. Monolitni nosači se koriste u analitičkim i preparativnim odvajanjima bioloških makromolekula s molekularnim masama od nekoliko tisuća pa do nekoliko stotina miliona Daltona. Veliki kapacitet ovih kromatografskih medija za biološke makromolekule kao i posebnost strukture monolitnih nosača koja omogućava prijenos makromolekula konvekcijom (10 mg plazmidne DNA/mL, 20 mg genomske DNA/mL), daje mogućnost izdvajanja većih količina čiste plazmidne i genomske DNA neovisno o ukupnom volumenu uzorka iz kojeg se izdvajanje izvodi ne koristeći toksične organske otopine. Prikladnom regeneracijom diska moguće je višekratno korištenje uz zadržavanje svih svojstava koje ga čine metodom izbora. U ovoj metodi koristi se CIM® ; DEAE disk visine 3 mm, promjera 12 mm i volumena 0, 34 mL od čega 60% čine protočni kanali. Kromatografija na disku se događa u prikladnom polipropilenskom kućištu u koji se disk stavlja neposredno prije kromatografije. Metoda se može izvoditi na HPLC sustavu ili korištenjem peristaltičke pumpe.

kromatografija, DNA

nije evidentirano