hrvatski

Usporedba osjetljivosti ugnježđene PCR i kvantitativne PCR u određivanju Bcr-Abl p210 prijepisa kronične mijeloične leukemije

Uvod: Za otkrivanje minimalne ostatne boleti u bolesnika s kroničnom mijeloičnom leuke mijom (KML) koji su postigli potpunu kliničku remisiju i potpun citogenetski odgovor može se primi je niti ugnježđena PCR (en gl. nested PCR, nPCR) i kvantitativna PCR u stvarnom vremenu (engl. quantitative real-time PCR, qPCR). Cilj liječenja je postizanje molekularne remisije, pa postizanje visoke osjetljivosti molekularne pretrage ima presudnu ulogu i kliničku primjenu. Usporedili smo razinu osjetljivosti nPCR i qPCR u otkrivanju BCR-ABL p210 prijepisa u modelu razrjeđenja Bcr/Abl-pozitivnih stanica. Materijali i metode: Za određivanje ra zine osjetljivosti načinjena su serijska razrjeđenja stanične linije K562 (Bcr-Abl pozitivne) sa staničnom linijom NB4 (Bcr-Abl negativnom) (raspon razrjeđenja pozitivnih stanica: 10-3-10-7). Izolirani uzorci RNA prepisani su u cDNA i testirani na p210 prijepis pomoću nPCR i qPCR. Objema metodama također su ispitani uzorci koštane srži i periferne krvi dvoje bolesnika s KML na terapiji imatinib-mesilatom. Rezultati: U testu staničnog razrjeđenja nPCR je pokazala osjetljivost za otkrivanje Bcr-Abl pozitivnih stanica od 10-5, dok je qPCR pokazala osjetljivost od 10-6. Obje su metode otkrile p210 prijepise u uzorcima koštane srži bolesnika s KML. Međutim, qPCR je uz to otkrila prijepise i u uzorcima periferne krvi, no uz nižu razinu prijepisa u usporedbi s uzorcima koštane srži. Zaključak: Iako se često navodi kako je nPCR za otprilike 1 log osjetljivija od qPCR, u našem pokusu s razrjeđenjem na biljeg pozitivne stanične linije K562 dokumentirali smo višu osjetljivost za standardiziranu metodu qPCR, koja je razvijena za potrebe Europskog programa za borbu protiv karcinoma.

nPCR ; qPCR ; osjetljivost ; otkrivanje p210

nije evidentirano