STVARANJE STABILNO TRANSFECIRANIH EUKARIOTSKIH STANICA HELA ZA PREKOMJERNU EKSPRESIJU ENZIMA S-Adenozilhomocistein hidrolaze (CROSBI ID 348170)
Ocjenski rad | diplomski rad
Podaci o odgovornosti
Regović, Maja
Vugrek, Oliver
hrvatski
STVARANJE STABILNO TRANSFECIRANIH EUKARIOTSKIH STANICA HELA ZA PREKOMJERNU EKSPRESIJU ENZIMA S-Adenozilhomocistein hidrolaze
S-adenozilhomocistein-hidrolaza (SAHH) katalizira hidrolizu S-adenozilhomocisteina (SAH), koji je produkt a ujedno i inhibitor S-adenozilmetionin (SAM)-ovisnih metiltransferaza. Kod normalnih fizioloških uvjeta, SAH se hidrolizira u adenozin i homocistein. Prethodna istraživanja su pokazala da inhibicija ili deficijencija SAHH uzrokuje smanjenje omjera SAM/SAH rezultirajući u smanjenoj transmetilaciji, dok efekt povećane aktivnosti SAHH na metabolizam SAM/SAH i reakcije metilacije još nije bio proučavan. Stoga, glavni cilj našeg istraživanja je bilo stvaranje modelnog sistema za proučavanje promjena uzrokovanih prekomjernom ekspresijom SAHH. Prekloniranjem cDNA SAHH iz vektora p32SAHHwt u ekspresijski vektor pcDNA3, kreirali smo konstrukt pcDNA3SAHHwt koji je bio prikladan za stabilno transficiranje stanica u kulturi. Konstruirani vektor je elekroporiran u HeLa stanice (stanice raka grlića maternice). Nakon selekcije stabilnih transfektanata koristeći otpornost na neomicin, mjerena je aktivnost SAHH i analizirana ekspresija gel-elektroforezom i imunodetekcijom. Rezultati su pokazali da je moguće stanice HeLa transficirati sa vektorom pcDNA3SAHHwt te načiniti stabilno transficirane stanice otporne na antibiotik neomicin. Unatoč uspješnoj transfekciji prekomjerna ekspresija gena za SAHH u neomicin otpornim stanicama HeLa nije uočena.
S-adenozilhomocistein-hidrolaza ; HeLa ; stabilna transfekcija ; elektroporacija
nije evidentirano
engleski
Generation OF STABLY TRANSFECTED EUKARIOTIC CELLS HeLa FOR S-Adenosylhomocisteine hydrolase
nije evidentirano
S-adenosylhomocysteine hydrolase ; stable transfection ; HeLa ; electroporation
nije evidentirano
Podaci o izdanju
51
21.12.2007.
obranjeno
Podaci o ustanovi koja je dodijelila akademski stupanj
Prirodoslovno-matematički fakultet, Zagreb
Zagreb