engleski

Testing for protein interactions in yeast Saccharomyces cerevisiae using the targeted in vivo co-immunoprecipitation assay and the array of endogenously tagged open reading frames

Razvijen je novi sistem za detekciju proteinskih interakcija u kvascu. Formirana je zbirka sojeva kvasaca koji eksprimiraju proteine, C-terminalno obilježene različitim epitopima sa svojih endogenih promotora, uključene u DNA replikaciju, rekombinaciju i popravak. "Mamac" protein sadrži V5 i 6xHis, a "plijen" se razlikuje od "mamca" u 3xVSV umjesto 6xHis. U kvaščevoj stanici protein obilježen sa His će formirati fiziološki kompleks sa svojim interakcijskim partnerima pa koristeći koimunoprecipitacijsku metodu možemo izolirati "mamac" i proteine koji s njim asociraju. Sistem je najprije korišen za reprodukciju interakcija opisanih u literaturi, a zatim i za detekciju proteina koji stupaju u interakcije sa Sae2, proteinom za kojeg se prepostavlja da ima ulogu u popravku dvostrukih lomova u DNA. Testiranje je rezultiralo pozitivnom interakcijom Sae2 sa Mre11, katalitičkom podjedinicom MRX kompleksa koji ima značajnu ulogu u procesiranju dvostrukih lomova u toku mejoze i mitoze.

endogenously tagged proteins; Mre11; Sae2-interacting partners

24/06