Napredna pretraga

Pregled bibliografske jedinice broj: 316034

Regeneracijska sposobnost stanica postnatalne zubne pulpe u miša


Braut, Alen
Regeneracijska sposobnost stanica postnatalne zubne pulpe u miša 2006., doktorska disertacija, Medicinski fakultet, Rijeka


Naslov
Regeneracijska sposobnost stanica postnatalne zubne pulpe u miša
(Regeneration capacity of the postnatal dental pulp cells in mice)

Autori
Braut, Alen

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, doktorska disertacija

Fakultet
Medicinski fakultet

Mjesto
Rijeka

Datum
26.07

Godina
2006

Stranica
76

Mentor
Polić, Bojan

Ključne riječi
Dentin; matične stanice; odontoblast; regeneracija tkiva; tkivni inženjering; zeleni fluorescentni protein; zubna pulpa
(Dental pulp; dentin; green fluorescent protein; odontoblast; stem cells; tissue engineering; tissue regeneration.)

Sažetak
Cilj istraživanja: Osnovni cilj doktorske disertacije bio je istražiti mogućnost postojanja progenitorskih stanica odontoblastne loze u postnatalnoj zubnoj pulpi miša, korištenjem transgena Colla1-GFP kao biljega, te ispitati njihovu sposobnost diferencijacije i sudjelovanja u regeneraciji zubnog tkiva. Materijal i metode: U radu sam koristio transgenične miševe pOBCol2.3-GFP koji specifično izražavaju zeleni fluorescentni protein (GFP) pod kontrolom fragmenta (2.3 kb) promotora za gen štakorskog kolagena tipa I. U prvom dijelu istraživanja sam uz pomoć fluorescentne mikroskopije i histoloških tehnika karakterizirao izražaj Col1a1-GFP transgena u različitim razdobljima razvoja zubnih tkiva i usporedio ga sa izražajem drugih poznatih biljega diferencijacije odontoblasta, poput DSPP i Dmp1, kako bih utvrdio mogućnost korištenja transgena u identifikaciji pojedinih razvojnih stadija odontoblasta. U cilju dokazivanja nazočnosti progenitorskih stanica odontoblasne loze izvršio sam transplantaciju koronarnih dijelova zubne, u kojima nije bilo diferenciranih odontoblasta, pod bubrežnu kapsulu SCID miševa. Tkiva nastala nakon transplantacije sam analizirao standardnim histološkim i histokemijskim tehnikama bojenja demineraliziranih i nedemineraliziranih uzoraka te in situ hibridizacijom za DSPP i Dmp1. Potencijal diferencijacije matičnih stanica analiziran je i u uvjetima kulture stanica zubne pulpe in vitro pri čemu je praćena sposobnost stvaranja kolonija, izražaj alkalne fosfataze te stvaranje minerala u izvanstaničnom matriksu. Stanice su također promatrane pod fluorescentnim svjetlom radi izražaja transgena (GFP), a ukupna RNK je izolirana u različitim vremenskim intervalima i korištena za Northern blot i RT-PCR analize. Rezultati: Karakterizacijom izražaja Col1a1-GFP transgena u zubnim tkivima miša utvrdio sam da je on prisutan u funkcionalnim i zrelim odontoblastima te da korelira s izražajem DSPP i Dmp1 gena. Korelacija je potvrđena u različitim fazama razvoja molara i kontinuirano rastućih inciziva. U transplantacijskim pokusima dobiveno tkivo pokazalo je stvaranje tubularnog i osteotipičnog matriksa s visokim sadržajem minerala i kolagena te polariziranim novostvorenim stanicama nalik na odontoblaste. Novodiferencirane stanice izražavale su visoke razine Col1a1-GFP i DSPP, što odgovara zrelom odontoblastnom fenotipu. U uvjetima stanične kulture izolirane stanice zubne pulpe stvarale su kolonije, izražavale povišenu razinu alkalne fosfataze te je opažena mineralizacija novostvorenog tkiva. One su također izražavale molekularne biljege diferenciranih odontoblasta poput: Colla1-GFP transgena, DSPP, OC te nisku razinu Dmp1-a. Zaključci: Colla1-GFP transgen (pOBCol2.3-GFP transgeničnih miševa) je izražen samo u zrelim formama odontoblasta i može se koristiti kao molekularni biljeg u praćenju diferencijacije odontoblasta u in vivo i u in vitro uvjetima. Koronarni dijelovi postnatalne zubne pulpe miša sadrže progenitorske stanice koje se mogu diferencirati i stvarati tubularni matriks, poput dentina u transplatacijskim uvjetima. Stanice odvojene od svog izvanstaničnog matriksa, u uvjetima stanične kulture, se također mogu diferencirati u odontoblastni fenotip, ali je proces sporiji nego kada se one transplantiraju zajedno sa svojim izvanstaničnim matriksom.

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Temeljne medicinske znanosti, Dentalna medicina



POVEZANOST RADA


Ustanove
Medicinski fakultet, Rijeka

Autor s matičnim brojem:
Alen Braut, (242782)