hrvatski

Regeneracijska sposobnost stanica postnatalne zubne pulpe u miša

Cilj istraživanja: Osnovni cilj doktorske disertacije bio je istražiti mogućnost postojanja progenitorskih stanica odontoblastne loze u postnatalnoj zubnoj pulpi miša, korištenjem transgena Colla1-GFP kao biljega, te ispitati njihovu sposobnost diferencijacije i sudjelovanja u regeneraciji zubnog tkiva. Materijal i metode: U radu sam koristio transgenične miševe pOBCol2.3-GFP koji specifično izražavaju zeleni fluorescentni protein (GFP) pod kontrolom fragmenta (2.3 kb) promotora za gen štakorskog kolagena tipa I. U prvom dijelu istraživanja sam uz pomoć fluorescentne mikroskopije i histoloških tehnika karakterizirao izražaj Col1a1-GFP transgena u različitim razdobljima razvoja zubnih tkiva i usporedio ga sa izražajem drugih poznatih biljega diferencijacije odontoblasta, poput DSPP i Dmp1, kako bih utvrdio mogućnost korištenja transgena u identifikaciji pojedinih razvojnih stadija odontoblasta. U cilju dokazivanja nazočnosti progenitorskih stanica odontoblasne loze izvršio sam transplantaciju koronarnih dijelova zubne, u kojima nije bilo diferenciranih odontoblasta, pod bubrežnu kapsulu SCID miševa. Tkiva nastala nakon transplantacije sam analizirao standardnim histološkim i histokemijskim tehnikama bojenja demineraliziranih i nedemineraliziranih uzoraka te in situ hibridizacijom za DSPP i Dmp1. Potencijal diferencijacije matičnih stanica analiziran je i u uvjetima kulture stanica zubne pulpe in vitro pri čemu je praćena sposobnost stvaranja kolonija, izražaj alkalne fosfataze te stvaranje minerala u izvanstaničnom matriksu. Stanice su također promatrane pod fluorescentnim svjetlom radi izražaja transgena (GFP), a ukupna RNK je izolirana u različitim vremenskim intervalima i korištena za Northern blot i RT-PCR analize. Rezultati: Karakterizacijom izražaja Col1a1-GFP transgena u zubnim tkivima miša utvrdio sam da je on prisutan u funkcionalnim i zrelim odontoblastima te da korelira s izražajem DSPP i Dmp1 gena. Korelacija je potvrđena u različitim fazama razvoja molara i kontinuirano rastućih inciziva. U transplantacijskim pokusima dobiveno tkivo pokazalo je stvaranje tubularnog i osteotipičnog matriksa s visokim sadržajem minerala i kolagena te polariziranim novostvorenim stanicama nalik na odontoblaste. Novodiferencirane stanice izražavale su visoke razine Col1a1-GFP i DSPP, što odgovara zrelom odontoblastnom fenotipu. U uvjetima stanične kulture izolirane stanice zubne pulpe stvarale su kolonije, izražavale povišenu razinu alkalne fosfataze te je opažena mineralizacija novostvorenog tkiva. One su također izražavale molekularne biljege diferenciranih odontoblasta poput: Colla1-GFP transgena, DSPP, OC te nisku razinu Dmp1-a. Zaključci: Colla1-GFP transgen (pOBCol2.3-GFP transgeničnih miševa) je izražen samo u zrelim formama odontoblasta i može se koristiti kao molekularni biljeg u praćenju diferencijacije odontoblasta u in vivo i u in vitro uvjetima. Koronarni dijelovi postnatalne zubne pulpe miša sadrže progenitorske stanice koje se mogu diferencirati i stvarati tubularni matriks, poput dentina u transplatacijskim uvjetima. Stanice odvojene od svog izvanstaničnog matriksa, u uvjetima stanične kulture, se također mogu diferencirati u odontoblastni fenotip, ali je proces sporiji nego kada se one transplantiraju zajedno sa svojim izvanstaničnim matriksom.

dentin; matične stanice; odontoblast; regeneracija tkiva; tkivni inženjering; zeleni fluorescentni protein; zubna pulpa

nije evidentirano