engleski

PriA and RecBCD functions cooperate to create a signal for UV-induced RA in Escherichia coli

Modifikacija DNA je obrambeni mehanizam zaštite bakterijske stanice od vlastitog sustava restrikcije i modifikacije. Zaštita vlastitog kromosoma postiže se metiliranjem specifičnih baza adenina i citozina unutar ciljnog mjesta prepoznavanja restrikcijske endonukleaze EcoKI. Međutim, u određenim uvjetima npr. nakon UV zračenja, u kromosomu bakterije E. coli mogu privremeno nastati nemetilirana ciljna mjesta prepoznavanja. Kada se nemetilirana mjesta nalaze u kromosomu restrikcijska endonukleaza EcoKI ih neće pocijepati, jer proteaza ClpXP modulira aktivnost enzima. Naime, proteaza ClpXP cijepa podjedinicu HsdR enzima EcoKI što inaktivira enzim, a fenomen je poznat pod imenom UV-inducirana inhibicija restrikcije (RA). Kako je prethodnim istraživanjima pokazano da UV-inducirana inhibicija restrikcije ovisi o genima recA, recBCD i lexA, predloženo je da kromosomska nemetilirana DNA nastaje homolognom rekombinacijom tijekom popravka oštećene DNA. U ovom istraživanju željeli smo istražiti koji su ostali rekombinacijski geni uključeni u nastanak nemetilirane DNA. U tu svrhu, pratili smo inhibiciju restrikcije enzima EcoKI mjerenjem preživljenja nemodificiranog faga lambda u stanicama ozračenim UV-svjetlom. Pretpostavili smo da će nedostatak produkta gena potrebnog za nastanak nemetilirane DNA smanjiti preživljenje nemodificiranog faga lambda. Gentičkom analizom pokazali smo da UV-inducirana inhibicija restrikcije ovisi o proteinu UvrA i da ovisi o nanošenju proteina RecA enzimom RecBCD. Također, pokazali smo da su geni recF/O/R vjerojatno potrebni za indukciju SOS odgovora i uspostavljanje replikacije DNA na substratu pripremeljenom enzimom RecBCD. Protein PriA je potreban da započne replikaciju u ovom procesu. Na temelju dobivenih rezultata predlažemo da je D-omča glavni međuprodukt u ovom procesu.

lambda phage; EcoKI enzyme; restriction alleviation; PriA protein; recBCD enzyme

nije evidentirano