hrvatski

Analiza ekspresije gena uključenih u signalni put Hh-Gli u primarnoj kulturi dermoida ovarija

Cilj ovog rada bio je uspostaviti primarnu kulturu dermoida ovarija i analizirati razinu ekspresije gena signalnog puta Hh-Gli. Ovaj signalni put važan je u embrionalnom razvoju, a njegova deregulacija povezana je s razvojnim malformacijama i nastankom tumora. Dermoidi predstavljaju tumorske tvorevine nastale iz embrionalnih stanica te imaju elemente razvojnih malformacija i tumora. Željela sam razviti eksperimentalni model na kojem bi se ovaj signalni put mogao dalje proučavati. Primarnu kulturu sam postavila relativno lagano. Stanice su dobro prianjale za podlogu i brzo su se razmnožavale. Utvrdila sam da su dermoidi heterogeni jer sam iz istog tumora razvila 6 različitih klonskih linija. Za analizu tih klonova odabrala sam RT-PCR.Ova precizna metoda omogućava finu gradaciju razine ekspresije između različitih klonskih linija. Nadalje, utvrdila sam da se u nekim linijama razina ekspresije gena signalnog puta Hh-Gli mijenja ovisno o koncentraciji seruma u mediju. Ekspresija proliferacijskog biljega PCNA se ne mijenja ovisno o uvjetima uzgoja i gen je podjednako aktivan u svim linijama. Ekspresija gena c-myc je također ovisna o koncentraciji seruma. U istim je linijama njegova ekspresija uvijek blago povećana. Ekspresija gena signalnog puta Hh-Gli se razlikuje između različitih klonskih linija a stanice se mogu podijeliti u tri kategorije- one koje imaju povećanu ekspresiju gena Shh ali ne i Ptch iGli1, drugu čine stanice koje pojačano eksprimiraju Ptch i Gli1 i treće koje umjereno eksprimiraju ciljne gene ovog signalnog puta.

signalni put Hh-Gli; primarna kultura; RT-PCR; dermoidi ovarija

nije evidentirano