hrvatski

Transformacija mutanata hdf1 i msh2 kvasca Saccharomyces cerevisiae integrativnim plazmidima s kratkim terminalnim heterologijama

Dvolančani lomovi u DNA su potencijalno letalna oštećenja, koja se u kvasca Saccharomyces cerevisiae gotovo uvijek popravljaju homolognom rekombinacijom. Početni korak u popravku dvolančanog loma je degradacija krajeva u smjeru 5'-3', pri čemu nastaju relativno dugački jednolančani 3'-krajevi koji služe kao klice za sintezu DNA u homolognoj regiji. Zbog toga, ukoliko dvolančani lom nastane unutar heterologne regije, sve nehomologne baze na 3'-kraju moraju biti uklonjene. Međutim, još uvijek nije utvrđeno u kojoj fazi popravka dvolančanog loma se to događa, a nisu identificirani ni svi geni čiji proteinski produkti sudjeluju u ovom procesu. U eksperimentalnom sustavu intraplazmidne rekombinacije smanjena efikasnost popravka dvolančanog loma induciranog u heterolognoj regiji primijećena je u mutantima rad1, msh2, msh3, srs2 i pol3 na temelju čega se može zaključiti da odgovarajući proteini sudjeluju u degradaciji slobodnih 3'-krajeva. U 'ovom su radu divlji tip kvasca i izogeni mutant msh2 transformirani lineariziranim integrativnim plazmidima s kratkim terminalnih heterlogijama, te je u oba soja primijećeno podjednako smanjenje efikasnosti transformacije ovisno o duljini heterolognih 3'-krajeva, Što upućuje na zaključak da u ovom eksperimentalnom sustavu produkt gena MSH2 ne sudjeluje u procesiranju krajeva DNA. Na temelju toga je predloženo da heterologni krajevi smanjuju uspješnost potrage za homologijom što bi mogao biti ograničavajući korak tijekom integracije plazmida u kvaščev genom. U ovom eksperimentalnom sustavu ispitan je i utjecaj gena HDFI jer se protein Hdfl u kompleksu s proteinom Hdf2 veže na slobodne krajeve DNA Zbog toga se moglo očekivati da će u ovom mutantu biti olakšana degradacija DNA u smjeru 3-5', ali to nije bio slučaj jer je i ovaj mutant pokazao istu ovisnost efikasnosti transformacije kao i divlji soj.

gen HDF1; gen MSH2; homologna rekombinacija; popravak dvolančanog loma; terminalne heterologije; S. cerevisiae

nije evidentirano