hrvatski

Transformacija kvasca Saccharomyces cerevisiae soj FFmre11 integrativnim plazmidima sa kratkim terminalnim heterologijama

Dvolančani lomovi ("double-strand breaks", DSB) DNA mogu se inducirati različitim fizikalnim i kemijskim agensima, ali nastaju i tijekom normalnog staničnog ciklusa. Ovakva potencijalno letalna oštećenja mogu se popraviti različitim mehanizmima, a kod kvasca Saccharomyces cerevisiae posebno je uspješan popravak homolognom rekombinacijom. Krajevi nastali dvolančanim lomom degradiraju se u 5'-3' smjeru, a jednolančani 3'-krajevi služe kao klice za sintezu DNA u homolognoj regiji. Jednolančani 3'-krajevi DNA u stanici kvasca relativno su stabilni, ali ako je dvolančani lom nastao unutar heterologne sekvencije potrebno je ukloniti sve nehomologne baze. Mehanizam procesiranja dvolančanih lomova još nije u potpunosti razjašnjen, no zna se da su u taj proces uključeni proteini Rad1, Rad10, Msh2, Msh3, Srs2 i DNA polimeraza δ . Protein Mre11 sudjeluje u formiranju i procesiranju dvolančanih lomova tijekom mejotičke rekombinacije, a na temelju in vitro studija pokazalo se da ima mogućnost degradacije krajeva DNA. Osim toga, protein Mre11 ima višestruku ulogu u očuvanju genetičke stabilnosti u kvasca, a homolog tog proteina pronađen je i u humanim stanicama. U ovom radu kvasac Saccharomyces cerevisiae mre11 transformiran je integrativnim plazmidima lineariziranim unutar kratke heterologne regije. Dobiveni rezultati pokazali su da duljina heterologne sekvence na krajevima plazmidima ima isti utjecaj na efikasnost transformacije kao i u divljem soju. Na temelju toga može se zaključiti da protein Mre11 ne sudjeluje u procesiranju dvolančanih lomova u mitotičkim stanicama kvasca.

protein Mre11; homologna rekombinacija; popravak dvolančanog loma; terminalne heterologije; kvasac

nije evidentirano