hrvatski

Učinak 5-azacitidina na posteljicu u štakora

Metilacija DNA je važan mehanizam regulacije ekspresije gena tijekom embrionalnog razvoja. Ona može biti promijenjena demetilacijskim agensom 5-azacitidinom (5azaC) koji se ugrađuje umjesto citozina u molekulu DNA. Za vrijeme placentacije, ekspresija raznih glikoproteina je ključna za normalan razvoj posteljice. Demetilacija DNA, uzrokovana s 5azaC mogla bi poremetiti tu normalnu ekspresiju glikoproteina. Pojedinačna doza 5azaC (5 mg/kg) injicirana je intraperitonealno skotnim ženkama od 1. do 19. dana gestacije. Životinje su žrtvovane 20. dana gestacije, a posteljice su izolirane i izvagane. T-testom je analizirana masa i promjer 1278 posteljica, a tamo gdje je nađena statistički značajna razlika ovih parametara slijedilo je ispitivanje glikoproteinskog sastava Western blot metodom sa lektinima SNA, DBA, UEA-I, PHA-E i usporedba s kontrolama. Za sve analizirane dane u kojima su pronađene razlike glikoproteinskog obrasca napravljena je histološka analiza debljine slojeva posteljice kao i stupanj proliferacije imunohistokemijom pomoću PCNA. Posteljice tretiranih skotnih ženki od 5.-14. dana gestacije značajno su manjih masa i promjera prema kontrolama. Usporedba glikozilacijskih obrazaca proteina posteljice pokazuje razlike među većinom promatranih skupina. Primjenom 5azaC 6. dana izostaje razvoj labirinta posteljice s jakom proliferativnom aktivnošću stanica bazalnog sloja. U tretiranim posteljicama smanjena je ekspresija glikoproteina molekularne mase manje od 60 kD. Od 7. do 10. dana 5azaC potpuno narušava strukturu posteljice: nema jasno vidljive granice labirinta i bazalnog sloja, i slaba proliferacija stanica trofoblasta. GP70 tih dana pokazuje jaču ekspresiju u tretiranih životinja, dok je GP40 jače izražen u kontrolama. Primjena 5azaC 11. i 12. dana pokazuje ponovnu uspostavu strukture posteljice s jasnom granicom labirinta i bazalnog sloja, ali i dalje s neprirodno velikim udijelom bazalnog dijela. Snažna ekspresija GP40 u posteljicama tretiranim 13. dana dovodi do povratka prirodnog odnosa labirinta i bazalnog sloja, s proliferacijom kao i u kontrolama što navodi na zaključak da je GP40 važan za normalan razvoj labirinta. Uočena odstupanja od normalne glikozilacije, nakon primjene 5-azaC, nedvojbeno upućuju na ključnu ulogu pravilne metilacije DNA u ekspresiji većine glikoproteina, a posebno GP70 kao preduvjeta za normalnu placentaciju.

metilacija DNA; 5-azacitidin; posteljica; glikoproteini

nije evidentirano