hrvatski

Utjecaj demetilacijskog sredstva 5-azacitidina na glikozilaciju proteina posteljice štakora

Metilacija DNA predstavlja važan mehanizam regulacije ekspresije gena tijekom embrionalnog razvoja, a može biti promijenjena primjenom demetilacijskog sredstva 5-azacitidina koji se ugrađuje umjesto citozina u molekulu DNA. Za vrijeme placentacije, ekspresija različitih glikoproteina je ključna za normalan razvoj posteljice. Demetilacija DNA, uzrokovana 5-azacitidinom mogla bi utjecati na normalnu ekspresiju glikoproteina tijekom placentacije. Pojedinačna doza 5-azacitidina (5 mg/kg tjelesne težine) injicirana je intraperitonealno skotnim ženkama 5., 8., 9., 11. i 13. dana gestacije. Životinje su žrtvovane 20. dana gestacije, a posteljice su izolirane i izvagane. Nakon SDS-PAG elektroforetskog razdvajanja i preslikavanja na sintetsku membranu (Western blot), glikoproteini su detektirani lektinima SNA, DBA, UEA-I i PHA-E. Posteljice tretiranih skotnih ženki bile su značajno manje mase u odnosu na kontrolnu skupinu, a usporedba glikozilacijskih obrazaca proteina posteljice pokazala je također razliku između promatranih skupina. GP70 je u svim promatranim danima gestacije i identifikacijom svim lektinima, pokazivao jaču ekspresiju u uzorcima tretiranih životinja. Za razliku od njega GP40 je svih promatranih dana uz korištenje svih navedenih lektina, jače izražen u kontrolnim uzorcima posteljica. Iznimka je detekcija lektinima UEA-I i SNA 13. dana gestacije kada dolazi do inverzije njegove ekspresije pa je izraženiji u tretiranim uzorcima. Uočena odstupanja od normalne glikozilacije, nakon primjene demetilacijskog agensa 5-azacitidina, nedvojbeno upućuju na ulogu pravilne metilacije DNA u ekspresiji glikoproteina koja je ključna za normalnu placentaciju. Od velikog broja istraženih glikoproteina, čini se da je posebno važna pravilna ekspresija GP70 koja je regulirana stupnjem metilacije pripadajućeg gena, vrlo bitnog za normalan razvitak posteljice.

demetilacija; 5-azacitidin; glikoproteini; posteljica; štakor

Rektorova nagrada Sveučilište u Zagrebu, 2005.