hrvatski

Kloniranje i heterologna ekspresija mišjjih gena za interleukin-12 i interleukin-5

Ukupna RNA izolirana je iz mišjih hibridoma H13 stanica, metodom reverzne transkripcije sintetizirana je u komplementarnu DNA (cDNA). Pomnoću odgovarajućih početnica umnoženi su geni za mišji interleukin-12 i interleukin-5. Umnoženi geni za interleukin-5 i alfa podjedinicu interleukina-12 ugrađeni su u plazmidni vektor pET-16b, a gen za beta podjedinicu interleukina-12 ugrađen je u pFastBacDUAL, te su sekvencirani. Nakon sekvenciranja kodirajuća regija interleukina-12alfa ugrađena je u rekombinantniplazmidni vektor pFastBacDUAL/IL-12beta. Dobivenim rekombinantnim plazmidnim vektorima pFastBacDUAL/IL-12 transformirane su bakterijske stanice E.coli DH10Bac, koje uz vlastiti bakterijski kromosom sadrže i bakulovirusni vektor s mjestomprihvaćanja za transpozon TN7. Mjesno specifičnom transpozicijom ekspresijske kazete geni za interleukin 12-alfa i interleukin-12beta ugrađeni su u bakulovirusni vektor. Rekombinantnim bakulovirusnim vektorima transficiranu seu stanice Sf-9 u kojim dolazi do ekspresije interleukina 12. Interleukin-5 eksprimiran je u bakterijskim stanicama E. coli BL21(DE3 pLysS). Elektroforezom u gelu poliakrilamida i metodom Western blota dokazana je ekspresija proteina interleukina-12 i proteina interleukina-5.

bakulovirusni ekspresijski sustav ; interleukin-5 ; interleukin-12 ; prokariotski ekspresijski sustav

nije evidentirano