hrvatski

Usporedba dviju metoda izolacije genomske DNA iz tumora središnjeg živčanog sustava čovjeka

Tehnike molekularne biologije omogućuju utvrđivanje nasljednih abnormalnosti i neoplazmatskog rasta stanica. Prvi korak u takvim testovima obično je izolacija DNA visoke molekularne težine iz krvi, koštane srži, tkiva ili kultiviranih jednojezgrenih stanica. Najčešće se koriste neautomatizirane metode, metoda izolacije DNA fenolom i kloroformom, te metoda izolacije DNA isoljavanjem proteina. Iako se izolacija fenolom i kloroformom uglavnom smatra najboljom metodom izolacije DNA, danas se traže zamjene te metode, kojima se izbjegavaju karcinogeni, fenol i kloroform. Kako bih pokazala da je metoda isoljavanjem proteina prihvatljivija, iz 30 sam tumora središnjeg živčanog sustava čovjeka izolirala DNA metodom fenola i klorofoma i metodom isoljavanja proteina, te usporedila uspješnost tih dviju izolacija spektrofotometrijskim mjerenjima koncentracije i čistoće dobivenih uzoraka DNA. Pokazala sam da u 53 % slučajeva metoda fenola i kloroforma daje veću koncentraciju DNA po miligramu korištenog tumorskog tkiva, međutim, kod metode isoljavanjem proteina, ukupna je koncentracija DNA u 500 μ l TE pufera dovoljna za kvalitetan PCR. Metoda izolacije DNA isoljavanjem proteina, s druge strane, u većini uzoraka daje čišću DNA nego metoda fenola i kloroforma. S obzirom na takve podatke, i na činjenicu da metoda izolacije DNA fenolom i klororformom predstavlja za čovjeka i za okoliš veću opasnost, puno dulje traje, napornija je, troši više kemikalija i najvjerojatnije degradira DNA u većoj mjeri, došla sam do zaključka da je izoliranje DNA metodom isoljavanja proteina prihvatljivije od metode fenola i kloroforma.

izolacija genomske DNA; tumori središnjeg živčanog sustava

Voditeljica : doc. dr. sc. Nives Pećina-Šlaus Suvoditeljica : dr. sc. Inga Marijanović