hrvatski

Određivanje flavonola u voću HPLC-metodom

Flavonoli su dio velike grupe polifenolnih spojeva (sekundarnih biljnih metabolita). Pojavljuju se u obliku O-glikozida, a najčešći šećerni ostatak je D-glukoza. U posljednje vrijeme privukli su značajnu pažnju zbog mnogih pozitivnih utjecaja na zdravlje ljudi, djelujući kao antioksidansi i antikancerogeni. Osim toga prirodni antioksidansi sve više zamjenjuju sintetičke antioksidanse u prehrambenim proizvodima, zbog strogih sigurnosnih standarda koje moraju zadovoljiti prehrambeni proizvodi. Stoga postoji trajni interes za određivanje flavonola u različitim prehrambenim proizvodima i hrani. U ovom radu određivani su flavonoli (kvercetin, miricetin i kempferol) u različitim vrstama voća (crni ribiz, crveni ribiz, borovnica, bazga, aronija, kupina, malina, jagoda, višnja, trešnja). Voće je ubrano na području Slavonije i smrznuto do analize. Glikozidi flavonola su ekstrahirani i hidrolizirani u aglikone pomoću 50 %-tne (v/v) vodene otopine metanola koja sadrži HCl (1, 2 M). Ekstrakcija i hidroliza provođena je u trajanju od 2 sata na temperaturi od 85 C. 20 ml ekstrakta ispareno je na temperaturi od 35  C do suha, a ostatak je otopljen u 2 ml metanola, filtriran kroz membranski filter veličine pora 0, 45 μ m (VariSep PTFE, Varian) i injektiran u HPLC sustav. Aglikoni flavonola određeni su reverzno faznom HPLC metodom. Korištene su dvije mobilne faze: mobilna faza A (0, 1 % otopina H3PO4) i mobilna faza B (100 % metanol). Provedena je gradijentna eluacija: od 0-30 min s 95 % A na 20 % A ; održavanje uvjeta od 30-33 min na 20 % A ; od 33-35 min s 20 % A na 95 % A. Analiza je provedena na HPLC analitičkom sustavu (Varian, USA), sastavljenom od ProStar 230 ternarne gradijentne pumpe, 310 UV/Vis detektora i ProStar 330 PDA detektora, te OmniSpher C18 kolone (dimenzija 250 x 4, 6 mm, veličine čestica punjenja 5 μ m) s ugrađenom predkolonom (ChromSep 1 cm x 3 mm). Kvercetin je nađen i kvantificiran u svim analiziranim uzorcima voća, u količini od 2.67-143.67 mg/kg svježe mase voća. Miricetin je identificiran u crvenom i crnom ribizlu, u količini od 1.74-21.26 mg/kg svježe mase voća. Kempferol je nađen u višnji i jagodi, u količini 0.84-5.20 mg/kg svježe mase voća. Dobiveni rezultati u skladu su s ranije objavljenim literaturnim podacima. U postupku validacije predložena HPLC metoda pokazala se kao brza, precizna i selektivna metoda za određivanje flavonoida u raznim vrstama voća i voćnim sokovima.

Flavonoli; Voće; HPLC

nije evidentirano