hrvatski

Pokušaji separacije humanog hormona rasta iz seruma

Zadatak je bio da se pokušaju separirati različiti oblici hGH pomoću pomoću kromatografskih tehnika. hGH je kompleksna molekula koju čini nekoliko oblika: 20000 daltonska varijanta i 22000 daltonski oblik koji mogu biti u monomernom obliku ili činiti dimere, te oblici nastali vezivanjem molekule hGH na proteinski nosač. Da bi se pokušalo iz humanog seruma separiraqti kromatografskim postupcima izohormone, pokušana je simulacija humanog seruma pomuću standarda za određivanje hGH koji su uzeti iz komercijalnih setova tvrtke "Pharmacia". Iz ovih ispitivanja može se zaključiti: 1) hGH se veže na S-izmjenjivač kof pH vrijednosti 3, 5-4, 5, a kod pH vrijednosti većih od pH 6 gotovo se ne veže na ovaj izmjenjivač. Nasuprot tome, hGH se ne veže na q-izmjenjivač kod pH vrijednosti veće od 6, 5. Iz krivulje elucije hGH s ovih izmjenjivača određena je i izoelektrična točka hormona rasta, pI 5, 3. 2) hGH se eluira s DEAE-celuloze, a elucija je bolja ukoliko se kao eluens koristi NaCl u odgovarjućem puferu. Isto tako elucija hGH s DEAE-celuloze je bolja ukoliko se koristi 50mM Tris-ac. pufer pH7, 8, a ne isti pufer veće pH vrijednosti (pH 8, 3). 3) U području izoelektrične točke hGH, ovaj hormon se gotovo ne može eluirati s izmjenjivača. 4) Koristeći slabiji izmjenjivač (DEAE-celulozu), moguće je djelomično razdvojiti hGH izohormone. 5) Na jačem anionskom izmjenjivaču (Q-Sepharose Fast Flow), separacija izohormona hGH moguća je ukoliko se hGH djelomično oslobodi kontaminacije serumskih proteina ili ukoliko se za eluciju koristi vrlo blagi gradijent soli.

hormon rasta (hGH); ionski izmjenjivači; izomeri hormona rasta

nije evidentirano