hrvatski

Izolacija i umnažanje stare DNA iz muzejskih preparata za genetička istraživanja crvenokljune galice (Aves: Corvidae: Pyrrhocorax pyrrhocorax)

Muzejski preparati predstavljaju izuzetno vrijedan izvor podataka za populacijsko - genetička istraživanja s vremenskog stanovišta. Svrha ovog istraživanja jest ispitati upotrebljivost metode za izolaciju i umnažanje DNA iz kože muzejskih ptica za daljnje genetičke analize, posebice za sekvenciranje mtDNA. Istraživanjem su obuhvaćena 24 muzejska primjerka iz muzeja The Natural History Museum, Velika Britanija, od koji su 22 primjerka bile jedinke vrste crvenokljuna galica (Pyrrhocorax pyrrhocorax), a dva primjerka su pripadala vrsti žutokljuna galica (P. graculus). Najstariji primjerak potječe iz 1874 godine, a najmlađi iz 1946. Laboratorijski dio istraživanja proveden je u laboratoriju namijenjenom isključivo za rad sa starom DNA kako bi se izbjegla moguća kontaminacija uzoraka današnjom DNA ili proizvodima reakcije PCR. DNA je izolirana iz komadića uzetog s ventralne strane nožnog prsta. Dio kontrolne regije mrDNA umnožen je reakcijom PCR u prisustvu specifičnih DNA klica. Proizvodi reakcije PCR razdvajani su elektroforezom u agaroznom gelu i bojani etidij-bromidom. Proizvodi reakcije dobiveni su iz 22 uzorka. Dva uzorka nisu dala proizvod, vjerojatno uslijed uznapredovale razgradnje DNA ili uslijed prisustva inhibitora reakcije PCR. Naknadnim sekvenciranjem proizvoda reakcije PCR utvrđeno je postojanje 6 haplotipova. Slijepa proba i negativna kontrola potvrdile su da niti u jednom slučaju nije došlo do kontaminacije uzoraka. DNA je uspješno izolirana iz uzoraka kože i umnožena reakcijom PCR u gotovo 92 % uzoraka. Ovim istraživanjem pokazalo se da se uz primjerene metode može postići vrlo dobar uspjeh pri radu sa starom DNA. Kvaliteta ovako dobivene DNA dovoljno je visoka za primjenu u zahtjevnijim laboratorijskim postupcima kao što je sekvenciranje.

crvenokljuna galica; genetički biljezi; mikrosateliti

nije evidentirano