hrvatski

Restrikcijski polimorfizam eksona 4 hepatocitnog činitelja rasta

Hepatocitni činitelj rasta (HGF) glavni je činitelj regeneracije jetre te regulira rast, razvoj, pokretljivost i morfogenezu stanica. Molekula HGF sastoji se od alfa (69kDa) i beta (34kDa)lanca povezanih disulfidnom vezom, a u strukturi sadrži četiri domene petlje. Gen je smješten na kromosomu 7 i sastoji se od 18 eksona i 17 introna. Četvrti i peti ekson kodiraju prvu strukturnu domenu petlje koja je neophodna za vezanje na receptor. Mutacije na takvim domenama vode patološkom procesu te je od bitne važnosti ispitati njihov polimorfizam i utvrditi povezanost s bolešću. Cilj ovog rada bio je pronaći optimelne uvjete za ispitivanje polimorfizma eksona 4 hHGF (humanog HGF) metodom polimorfizma dužine restrikcijskih fragmenata (restriction fragment lenght polymorphism, RFLP) nakon umnažanja ulomka DNA pomoću lančane reakcije polimeraze (polimerase chain reaction). DNA je izolirana makrometodom iz 70 uzoraka pune krvi (40 zdravih dobrovoljaca i 30 ispitanikas alkoholnom cirozom jetre), određena joj je koncentracija i ispitana kvaliteta elektroforezom na 0.3% MP agarozi (mini gel elektroforeza u TAE 1X puferu). Ulomak od 214 pb umnožen je u optimiranoj lančanoj reakciji polimeraze i elektroforetski provjeren na 1, 5% MP agarozi te pocijepan restrikcijskim enzimom Mva I (Boehringer Mannheim). Restrikcijski fragmenti od 136 i 78 pb razdvojeni su elektroforezom na 4% NuSieve agarozi i poliakrilamidnom gelu (12%, 15%). Rezultati su pokazali da su za ispitivanje polimorfizma eksona 4 hHGF optimirani uvjeti svih reakcija.

hepatocitni činitelj rasta; bolest jetre; PCR-RFLP

nije evidentirano