hrvatski

Inhibicija izvanstanične lipaze bakterije Streptomyces rimosus

Proučavan je utjecaj triju inhibitora: fenilmetilsulfonil fluorida (PMSF), 3, 4-diklorizokumarina (DCI), tipičnih inhibitora serinskih proteaza i tetrahidrolipstatina (THL), inhibitora lipaza iz gušterače, na aktivnost izvanstanične lipaze bakterije Streptomyces rimosus (SrLip). SrLip je inkubirana s različitim koncentracijama PMSF uz prisutnost potencijalnih aktivatora (1, 4-dioksan, propan-2-ol, n-oktil-beta-glukopiranozida) i bez njih, a mjerenjem aktivnosti nije potvrđen utjecaj potencijalnih aktivatora na djelovanje PMSF prema SrLip te je potvrđena otpornost SrLip prema PMSF. Proučavano je također i inhibicijsko djelovanje DCI i THL na SrLip. Gotovo potpuna inhibicija SrLip s DCI, uz molarni suvišak od 30 puta, primijećena je već nakon 15 min, dok je za THL uz molarni suvišak od 5560 puta i volumni udio propan-2-ola od 50% primjećena za 24 sata. Kinetika inhibicije SrLip s DCI praćena je mjerenjem preostale aktivnosti nakon predinkubacije. U uvjetima znatno veće koncentracije DCI kinetika inaktivacije SrLip slijedi reakciju pseudoprvog reda za koju je određena konstanta inhibicije koja je korištena za izračun konstante inhibicije drugog reda (k2 = 53439, 2 mol-1 dm3 min-1). Proučavana je i kinetika inhibicije SrLip s THL uz volumni udio propan-2-ola od 50%. Određena je konstanta inhibicije drugog reda (k2 = 16, 9 mol-1 dm3 min-1). Iako je inhibicijsko djelovanje THL znatno slabije neego DCI ovo je prvo izvješće o inhibiciji mikrobijalnih lipaza s THL bez prisustva supstrata. U svrhu dobivanja monokristala pogodnog za određivanje 3D strukture metodom rentgenske difrakcije, uz molarni suvišak DCI od 600 puta, pripremljen je kompleks SrLip DCI. Kristalizacija je provedena metodom difuzije para u visećoj kapi te su dobiveni monokristali koji su poslužili za prvo prikupljanje difrakcijskih intenziteta.

lipaza; Streptomyces rimosus; inhibicija; kristalizacija; fenilmetilsulfonil fluorid; 3; 4-diklorizokumarin; tetrahidrolipstatin

nije evidentirano