hrvatski

Karakterizacija rekombinantnog proteina spektroskopskim metodama i spektrometrijom masa

Rekombinantni protein rHuINF alpha-2b visoke čistoće (98%) očuvanosti proučavan je spektroskopskim metodama i spektrometrijom masa kao modelni sustav za karakterizaciju cijele skupine proteina koji djeluju na rad imunog sustava. Analizom intaktne molekule interferona alpha-2b metodom cirkularnog dikroizma nađen je udio alpha-uzvojnice od 56%. Metodom fluorescencijske spektroskopije promatrane su konformacijske promjene proteina u ovisnosti o pH vrijednosti otopine i koncentraciji denaturanta gvandin-hidroklorida. Protein RHuINF alpha-2b pobuđen pri 280 nm emitira zračenje pri 340 nm što odgovara fluorscenciji triptofana smještenog na površini proteina. Fluorescencija fanilalanina i triozina nije uočena. Spektrometrijom masa analizirani su triptički fragmenti proteina rHuINF alpha-2b. U radu je korišten instrument MALDI-TOF uz reflektron. Analizom triptičkih fragmenata potvrđeno je 95% aminokiselinskog slijeda u rHuINF alpha-2b. Redoslijed nastajanja triptičkih fragmenata praćen je u određenim vremenskim intervalima.

karakterizacija; rHuINF alpha-2b; spektrometrija masa; cirkularni dikroizam; fluorescencija; triptički fragmenti

nije evidentirano