hrvatski

Protein RecA iz bakterije Streptomyces rimosus

Dosadašnjim je istraživanjima utvrđeno da gen recA iz bakterije Streptomyces rimosus kodira protein dug 376 aminokiselina, molekularne mase 39702. Protein pokazuje značajnu homologiju s bakterijskim proteinima RecA, no posjeduje dugi C-kraj koji je pozitvno nabijen i može formirati dodatnu (-uzvojnicu. S ciljem istraživanja moguće funkcije neobičnog C-kraja, u ovome su radu konstruirana dva mutirana oblika gena recA na plazmidu. Mutirani geni kodiraju proteine RecA s delecijama od 21 (RecA1-355), odnosno 51 (RecA1-325) aminokiseline na C-kraju. Konstruiran je i soj recA bakterije S. rimosus, ugradnjom E. coli plazmida (koji nosi isječak gena recA od 450 pb i gen otpornosti na eritromicin) jednostrukim prekriženjem u lokus recA na kromosomu. Dobiveni soj recA je osjetljiv na UV-zračenje i raste sporije od divljeg soja, ali se još uvijek lako uzgaja i uspješno transformira elektroporacijom. Specifičnim protutijelima, pripravljenim na protein RecA iz S. rimosus (prekomjerno proizveden u E. coli) potvrđeno je da soj recA ne proizvodi protein RecA. Protein RecA kodiran genom na plazmidu pod kontrolom vlastitog SEP-promotora, može u potpunosti nadomjestiti funkciju proteina RecA u soju recA nakon UV-zračenja, dok proteini RecA1-355 i RecA1-325 mogu to samo djelomično. Soj S. rimosus recA opisan u ovom radu prvi je uspješno konstruiran soj recA kod streptomiceta.

C-kraj; ekspresija; RecA; rekombinacija; soj recA; Streptomyces rimosus

nije evidentirano