hrvatski

Specifična uloga enzima RecBCD pri konjugaciji u bakteriji Escherichia coli

Jedina dosad poznata uloga enzima RecBCD u konjugaciji je ona u stanici-recipijentu. Tu RecBCD ulazi u dvolančanu DNA nastalu transferom T-lanca i, odvijajući je, stvara jednolančane regije, glavne supstrate za homolognu rekombinaciju. Kako bismo utvrdili ulogu RecBCD-a u donoru, konstruirali smo recB Hfr i F' sojeve. recB-mutanti Hfr-ova su vrlo sporo rasli, jer su slabo vijabilni (što je pokazano određivanjem omjera broja plakova i broja kolonija koje daju sojevi lizogeni na fag cI857). Tijekom supkultivacije, pojavile su se UV-rezistentne, brzorastuće varijante (vjerojatno sbcA) ovih mutanata. Tijekom konjugacije, krivulja koja prikazuje prijenos donorskih markera u recipijent, je bila puno strmija u (nekim) recB Hfr-ovima, nego u donoru divljeg tipa. To je potvrđeno i pokusima zigotske indukcije (pri konjugaciji sa +-lizogenim donorima), koja je imala puno nižu frekvenciju sa recB Hfr-ima, nego sa donorima divljeg tipa. Mutacija recD u Hfr-ovima nije značajno poremetila konjugacijski prijenos njihove DNA, niti vijabilnost. Pretpostavljamo da u održavanju normalne stanične vijabilnosti Hfr-ova, RecBCD sudjeluje tako da popravlja dvolančani lom uzrokovan kolapsom replikacijske vilice nakon što ona naiđe na jednolančani usjek u oriT-slijedu integriranog F-plazmida. RecBCD sudjeluje i u konjugacijskom prijenosu DNA iz (nekih) Hfr-ova. Pri tome RecBCD vjerojatno djeluje zajedno sa helikazom TraI, koja je, do sada, smatrana jedinim enzimom potrebnim za konjugacijski prijenos DNA.

Bakterija Escherichia coli; konjugacija; RecBCD enzim

nije evidentirano