hrvatski

Uspješnost stimulacije jajnika krava u postupku transvaginalne ultrazvučne punkcije i uzgoja in vitro goveđih zametaka

IVA GETZ USPJEŠNOST STIMULACIJE JAJNIKA KRAVA U POSTUPKU TRANSVAGINALNE ULTRAZVUČNE PUNKCIJE I UZGOJA IN VITRO GOVEĐIH ZAMETAKA SAŽETAK DOKTORSKE DISERTACIJE Dvadeset i četiri plotkinje simentalske pasmine: od toga 8 spolno zrelih junica u dobi od 16 do 24 mjeseca i 16 krava u dobi od 2, 5 do 6 godina, sinkronizirane su i nasumice podijeljene su u tri grupe po osam životinja. Prva grupa stimuliranih davateljica obuhvaćala je junice (n=4) i krave (n=4) kod kojih smo aspirirali jajne stanice nakon dvodnevne stimulacije jajnika s preparatom folikulostimulirajućeg hormona (Folltropin&reg ; -V, Vetrepharm Inc., London, Canada) kojeg smo injicirali davateljicama i.m. dva puta dnevno u jednakim dozama tijekom 2 dana (ukupna doza: 200 mg NIH-FSH-P1). Transvaginalnu ultrazvučnu aspiraciju jajnih stanica izvršili smo 48 sati nakon zadnje FSH injekcije. Postupak smo ponavljali jedanput tjedno tijekom 4 uzastopna tjedna (ukupno 4 punkcije po svakoj davateljici). Druga grupa stimuliranih davateljica obuhvatila je junice (n=5) i krave (n=3) kod kojih smo aspirirali jajne stanice za IVP nakon stimulacije jajnika s FSH, ali uz prethodnu aspiraciju dominantnog folikula prije započinjanja stimulacijskog tretmana (DF-/FSH skupina). Kao i u prethodnoj grupi, transvaginalnu ultrazvučnu aspiraciju jajnih stanica izvršili smo 48 sati nakon zadnje FSH injekcije. Postupak smo ponovili svaka dva tjedna, tijekom dvomjesečnog razdoblja (ukupno četiri punkcije po svakoj davateljici). U kontrolnoj skupini krava u ciklusu (n=8) su jajne stanice aspirirane dva puta tjedno tijekom mjesec dana, bez prethodne hormonske stimulacije jajnika. U FSH skupini davateljica aspirirano je ukupno 257 jajnih stanica iz 378 folikula, odnosno prosječno 8, 03 jajne stanice po punkciji. Od toga su 202 jajne stanice ušle u postupak dozrijevanja in vitro, odnosno prosječno 6, 31 jajnih stanica po aspiraciji. Broj jajnih stanica za IVM kretao se u širokim granicama od najmanje dobivene 1 do najviše 21 jajne stanice po aspiraciji. U DF-/FSH skupini davateljica aspiracija dominantnog folikula prije započinjanja FSH tretmana prouzročila je raniji rast najmanjih folikula promjera 2 do 5 mm u prvih 12 sati nakon zadnje FSH injekcije, no ukupan broj folikula po kategorijama nije se razlikovao 24 i 48 sati nakon završetka stimulacijskog tretmana. U ovoj smo skupini aspirirali smo ukupno 243 jajne stanice iz 375 folikula, odnosno prosječno 7, 59 jajne stanice po punkciji. No, treba napomenuti da je u ovoj skupni davateljica transvaginalna ultrazvučna aspiracija jajnih stanica rađena svaki drugi tjedan, dok je u prethodnoj, FSH skupini rađena svaki tjedan. U ovoj skupini ukupno je 183 jajnih stanica ušlo u IVM, odnosno 5, 71 po punkciji. Od krava u ciklusu (kontrolna skupina) aspirirali smo ukupno 150 jajnih stanica iz 299 folikula, odnosno prosječno 4, 69 jajne stanice tjedno. Nakon kategorizacije 132 jajne stanice ušle su u daljnji postupak dozrijevanja in vitro, odnosno 4, 12 jajne stanice tjedno. Nisu utvrđene statistički značajne razlike u broju aspiriranih jajnih stanica prve, druge, treće i četvrte kategorije između stimuliranih i nestimuliranih davateljica, ali je kod stimuliranih davateljica u obje skupine utvrđeno statistički signifikantno više (P<0, 05) ekspandiranih jajnih stanica koje nisu ušle u IVM postupak. Ukupan broj stanica koje su ušle u IVM postupak, odnosno jajne stanice prve, druge i treće kategorije, bio je statistički signifikantno niži (P<0, 05) kod nestimuliranih krava. U FSH skupini davateljica uspješno je oplođeno ukupno 166 jajnih stanica, odnosno 79, 6%. Sedmog dana uzgoja in vitro dobili smo ukupno 97 morula i blastocista, odnosno 3, 03 morule i blastociste po punkciji ili 44, 1%. S obzirom da smo postupak kod svake davateljice ponavljali po četiri puta, ukupno smo uzgojili in vitro 12, 12 morula i blastocista po davateljici. U DF-/FSH skupini uspješno je oplođeno ukupno 162 jajnih stanica, odnosno 86, 4%. Sedmog dana uzgoja in vitro dobili smo ukupno 70 morula i blastocista, odnosno 2, 18 morule i blastociste po punkciji ili 35, 1%. S obzirom da smo postupak kod svake davateljice ponavljali po četiri puta, ukupno smo in vitro uzgojili 8, 75 morula i blastocista po davateljici. Kod krava u ciklusu (kontrolna skupina) uspješno su oplođene 101 jajne stanice, odnosno 74, 9%. Sedmog dana uzgoja in vitro dobili smo ukupno 64 morula i blastocista, odnosno 2, 0 morule i blastociste tjedno. Tijekom 4 tjedna po davateljici smo uzgojem in vitro dobili ukupno 8, 0 kvalitetnih morula i blastocista. Nije utvrđena statistički značajna razlika u broju morula i blastocista 7. dana uzgoja in vitro između pojedinih skupina, ali je utvrđena statistički značajna razlika (P<0, 05) u broju degeneriranih blastocista 7. dana uzgoja in vitro između nestimuliranih (kontrola) i stimuliranih plotkinja. Nakon hormonske stimulacije davateljica dobili smo više jajnih stanica, ali je među njima bio i veči broj jajnih stanica lošije kvalitete, koje su bile isključene iz daljnjeg postupka. S obzirom da osim uspjeha aspiracije, na širu primjenu transvaginalne ultrazvučne aspiracije jajnih stanica utječe i isplativost i cijena čitavog postupka, možemo preporučiti kao metodu izbora u našim uvjetima OPU krava i junica u ciklusu, bez hormonske stimulacije.

Krava; stimulacija jajnika; dominantni folikul; transvaginalna ultrazvučna punkcija jajnika; jajna stanica; oplodnja in vitro; uzgoj in vitro; goveđi zametak

nije evidentirano