hrvatski

Heteroduplex analiza (Metodološki tečajevi u biologiji i medicini)

Heteroduplex analiza je indirektna metoda otkrivanja mutacija koja se temelji na analizi produkata reakcije PCR te elektroforezi u nedenaturirajućem gelu poliakrilamida. Ovom metodom moguće je u umnoženim odsječcima DNA detektirati varijacije u jednom nukleotidu te male insercije i delecije za što se ova metoda i daleko češće koristi. Metoda se temelji na sporijem kretanju heterodupleksa u nedenaturirajućem gelu poliakrilamida u odnosu na odgovarajući homodupleks. Prednost ove metode je da se njome može analizirati velik broj uzoraka te se ovom metodom probiru uzorci kojima će se odrediti slijed nukleotida metodom sekvencioniranja DNA. Uzorci se metodom PCR umnože iz početne DNA, a zatim se denaturiraju i renaturiraju pri čemu nastaju četiri dvolančana produkta: homodupleks divljeg tipa, homodupleks mutiranog tipa te dva heterodupleksa, koji se zatim razdvajaju u nedenaturirajućem gelu poliakrialamida. U ovoj vježbi biti će prikazana usporedba konvencionalne metode heterodupleks analize u nedenaturirajućem gelu poliakrilamida te heterodupleks analiza na komercijalno dostupnom sistemu za elektroforezu i odgovarajućim komercijalnim gelovima.

heteroduplex analiza

nije evidentirano