engleski

Determination and purification of mouse spermatogonia with Stra8 promoter gene

Spermatogeneza je proces proliferacije i diferencijacije muških spolnih stanica u vrijeme spolne zrelosti. Spermatogonije, osobito matične spermatogonije, neophodne su za održanje spermatogeneze. Studije spermatogonija učinjene su morfološkim metodama, no prava priroda spermatogonija još je uvijek nepoznata. U ovom radu, sa ciljem izolacije spermatogonija, karakterizirana je promotorsku regija Stra8 lokusa specifičnog za mišje spermatogonije. 400 parova baza uzvodno od transkripcijskog početka dovoljno je za ekspresiju luciferaze kao reporter gena u testisima Stra8/luc transgeničnih miševa. Sekcije testisa miševa prije spolne zrelosti i u toku razvoja pokazuju da je klonirani promotor aktivan u spermatogonijama, no za razliku od endogenog gena, kod odraslih miševa samo u frakciji spermatogonija. Za izolaciju i identifikaciju spermatogonija koje ekspresiraju transgen generirane su Stra8/HAglo trangenične porodice kod kojih isti promotor vodi ekspresiju neutralnog površinskog biljega (HAglo CD4) građenog od dvije domene ljudskog CD4 proteina spojenih na transmembransku i citoplazmatsku regiju hemaglutinina influence. CD4+ stanice purificirane magnetskom izolacijom su morfološki homogene i ekspresiraju biljege mišjih spermatogonija: RBM i matičnih stanica: integrin-b1 i Ep-CAM, a negativne su na c-kit, biljeg diferenciranih stanica. Uspješnost kolonizacije neplodnih testisa nakon injektiranja purificirane frakcije stanica viša je usporedbi sa skupinom kojoj je injektirana suspenzija ukupnih stanica spermatogenetske loze.

spematogonia; stem cells; Stra8; magnetic cell sorting; transplantation

nije evidentirano