hrvatski

Genetička identifikacija autohtonih sojeva Saccharomyces cerevisiae primjenom RAPD metode

Spontana alkoholna fermentacija najčešće je vođena sojevima Saccharomyces cerevisiae koji se sukcesivno izmjenjuju kroz proces fermentacije s različitim metaboličkim profilima. Precizno genetički definirani sojevi autohtonih kvasaca mogu se selekcionirati te upotrebljavati kao starter kulture u proizvodnji tipičnih vina za određene regije. Cilj ovih istraživanja je izolacija, identifikacija i utvrđivanje genetske varijabilnosti prirodne populacije autohtonih sojeva S. cerevisiae kultivara Plavac mali s izdvojenih vinogradarskih područja poluotoka Pelješca i otoka Brača.Uzorkovanja grožđa kultivara Plavac mali iz berbe 2000. godine provedena su na izdvojenim vinogradarskim položajima Postup i Putnikovići (poluotok Pelješac), te položaj Bol (otok Brač). Pokus spontane alkoholne fermentacije s grožđem navedenih lokaliteta je postavljen u bioreaktorima na Fakultetskom znanstveno - nastavnom poligonu Jazbina. Uzorci mošta triju lokaliteta uzimani su tijekom spontane alkoholne fermentacije, te je izvršena izolacija kvasaca.Izolati kojima je fiziološki dokazana pripadnost skupini Saccharomyces sensu stricto dalje su diferencirani molekularnim postupcima. Izolati kojima je postupkom PCR-RFLP dokazana pripadnost vrsti S. cerevisiae podvrgnute su RAPD analizi kako bi se identificirali pojedinačni sojevi.RAPD metodom dobiveni su karakteristični DNA obrasci za svaki ispitivani soj. RAPD obrasci prevedeni su u dvodimenzionalnu binarnu matricu i nakon provedene klaster analize za svaki pojedinačni lokalitet, pomoću NTSYS programa dobiveni su dendrogrami koji pokazuju relativnu sličnost između istraživanih izolata. Dobiveni rezultati RAPD analize sojeva sva tri pojedinačna lokaliteta potvrdila su heterogenost populacije S. cerevisiae. Ispitivani su sojevi pojedinačnih lokaliteta, kako bi se utvrdilo da li postoje razlike između sojeva prema fazama fermentacije. Rezultati dobiveni primjenom RAPD metode potvrdili su primjenjivost i osjetljivost metode u identifikaciji sojeva S. cerevisiae. Utvrđeno je postojanje grupe vrlo srodnih sojeva izoliranih s različitih lokaliteta. Na osnovu RAPD analize moguće je zaključiti da sojevi koji dominiraju tijekom burne faze fermentacije najčešće nisu prisutni u završnoj fazi fermentacije. Rezultati ovih istraživanja omogućuju daljnju selekciju najučinkovitijih sojeva kvasaca i njihovo korištenje kao starter kultura u biotehnologiji vina.

S. cervisiae; RAPD

nije evidentirano