hrvatski

Istraživanje razvojnih sposobnosti mišjeg zametka u eksperimentalnom sustavu kulture in vitro

Kultura in vitro koristi se u istraživanju normalnog i poremećenog razvoja zametaka sisavaca. Postimplantacijski mišji zameci bez izvanembrionalnih ovojnica kultivirani su s ciljem preciznog i kontinuiranog praćenja vremenskog slijeda pojavljivanja i diferencijacije pojedinih vrsta tkiva. Embrionalni razvoj in vitro uspoređen je s razvojem in situ. Serijski histološki rezovi mišjih zametaka koji su se razvijali in situ (8.5, 9.5, 10.5, 11.5 dana) odgovaraju morfološkim parametrima po Theileru. Zameci miša kultivirani su na stadiju gastrulacije (7.5 dana) u Dulbeccovom modificiranom Eaglovom mediju s 20% fetalnog goveđeg seruma. Nakon 1, 2, 3, 4, 7, 10, 12 i 14 dana eksplantati su histološki obrađeni i serijski rezovi su analizirani svjetlosnim mikroskopom. U prva 2 dana kultiviranja diferencijacija tkiva bila je osudna. Nakon 3. dana kulture uočeni su neuroepitel, površinski epitel i cilindrični epitel koji odgovara primitivnom crijevu. Od 4. do 7. dana neuroepitel s uočljivom bazalnom membranom oblikovao je cjevaste tvorbe u mezenhimu. Neuroblasti i mnogoslojni pločasti oroženi epitel diferencirali su se od 10. do 12. dana kulture. Nakon 14. dana diferencirali su se derivati triju zametnih listića: mnogoslojni pločasti oroženi epitel, vezivo, hrskavica s perihondrijem, miotube, krvne žile, jednoslojni epitel i višeredni cilindrični epitel s trepetljikama. Neuroepitel i primitivno crijevo zaostaju 2 dana u razvoju u odnosu na razvoj in situ. Daljnjim razvojem razlike između in vitro i in situ razvoja postajale su sve izraženije. Međutim, osnovne vrste tkiva diferencirale su se nakon 14. dana in vitro razvoja, iako je razvoj bio usporen prijenosom zametaka u model kulture organa i značajno nižim postotkom seruma nego u sličnim pokusima.

embrionalni razvoj; in vitro; in situ

nije evidentirano