hrvatski

Pročišćavanje virusa i nukleinskih kiselina na monolitnim kromatografskim nosačima

Veličina i nestabilnost bioloških makromolekula često je ograničavajući faktor u primjeni kromatografskih koraka u postupcima njihove izolacije i pročišćavanja. Monolitni kromatografski nosači imaju strukturu koja omogućuje konvektivni tok mobilne faze te stoga i brža odjeljivanja, a uslijed većih dimenzija pora moguća su odvajanja i makromolekularnih struktura i kompleksa. U ovom radu ispitano je vezanje, odvajanje i koncentriranja virusa ospica i mumpsa te plazmidne DNA iz složenih otopina na monolitnom slabom anionskom izmjenjivaču CIM&reg ; ; (Convective Interaction Media) uz zadržanje njihovih bioloških aktivnosti i osobitosti. Razvijena je i optimirana kromatografska metoda koncentriranja virusa te je uvođenjem kromatografije prije izolacije RNA osjetljivost molekularne detekcije virusa metodom RT-PCR povećana 4 puta. Unatoč uspješnom vezanju i otpuštanju, udio infektivnih viriona nakon kromatografije bio je manji od 1, 5%. Razvijena je brza kromatografska metoda izolacije i pročišćavanja plazmidne DNA iz bakterijskog lizata. Uzorak plazmidne DNA imao je zadovoljavajuću čistoću i kvalitetu, a izolacija je postignuta bez upotrebe RNaze.

pročišćavanje virusa; koncentriranje virusa; detekcija virusa; izolacija plazmidne DNA; pročišćavanje plazmidne DNA; monolitne kromatografske kolone

nije evidentirano