hrvatski

Utjecaj temperature pohranjivanja na aktivnost peroksidaza u iglicama smreke

Peroksidaze su enzimi s brojnim funkcijama u biljnim stanicama, a jedna od njih je i njihova ključna uloga pri smanjenju i neutralizaciji stresa. Stoga su danas ovi enzimi zanimljiv i česti objekti biokemijskih istraživanja. Svrha moga rada bila je proučiti utjecaj pohranjivanja na različitim temperaturama u vremenskom periodu od trideset dana na ukupnu aktivnost peroksidaza u ekstraktu ovosezonskih iglica vrste Picea abies L. Karst. Nakon pripreme ekstrakta aktivnost ukupnih peroksidaza praćena je u reakciji alikvota ekstrakta s gvajakolom i H2O2, a nastali obojeni produkt je kvantitativno određen mjerenjem apsorbancije na 470 nm pomoću spektrofotometra Analytik jena SPECORD 40. Tako su analizirani uzorci koji su prethodno bili pohranjeni na različitim temperaturama (-196&ordm ; C, -20&ordm ; C, +4&ordm ; C, +24&ordm ; C i +37&ordm ; C). Mjerenja su vršena svaki dan od prvog do desetog dana, svaki drugi dan do osamnaestog dana, te trideseti dan pokusa. Enzimski ekstrakti nakon 30 dana pohranjivanja na različitim temperaturama također su podvrgnuti nativnoj elektroforezi na poliakrilamidnom gelu, koji je potom inkubiran u supstratu peroksidaza (gvajakol i H2O2). Dobivene smeđe obojene vrpce odraz su aktivnosti peroksidaza. Nakon reakcije, gel je skeniran, a dobivena slika analizirana denzitometrijski pomoću računalnog programa ImageJ. Obje metode su pokazale tri različite ovisnosti proučenih uzoraka o temperaturi pohranjivanja. Ekstrakti čuvani na -196&ordm ; C i -20&ordm ; C nisu mijenjali aktivnost u usporedbi s danom izolacije ; uzorci pohranjeni na +24&ordm ; C i +37&ordm ; C izgubili su aktivnost tijekom 30 dana pohranjivanja, oni na +37&ordm ; C znatno brže od onih na +24&ordm ; C ; konačno u uzorcima čuvanim na +4&ordm ; C došlo je do porasta enzimske aktivnosti, koja je ostala povećana sve do kraja pokusa. Sve opisane promjene potvrđene su statistički. Analiza elektroferograma pokazala je da svaki uzorak posjeduje dva izoenzima, pri čemu iznosi zbroja njihovih površina za svaku temperaturu pohranjivanja oponašaju rezultate dobivene mjerenjem ukupne aktivnosti enzima spektrofotometrijski. Nije bilo razlike u zastupljenosti pojedinih izoenzima između uzoraka. Raspravlja se o mogućim uzrocima uočenih promjena. Na osnovu dobivenih rezultata navode se neke preporuke obzirom na način pohranjivanja i čuvanje enzimskih ekstrakata.

smreka; iglice; peroksidaze; temperatura; pohranjivanje

nije evidentirano