hrvatski

Konstrukcija plazmida za optimalnu ekspresiju fuzijskog proteina YFP-Arp3 u vrsti Dictyostelium discoideum, Raper (1935)

Polimerizacija aktina je glavni pokretač prilikom staničnog gibanja, diobe stanice, endocitoze, egzocitoze i općenito stanične dinamike. Prije nekoliko godina otkriven je proteinski kompleks Arp2/3 i ustanovilo se da on započinje sintezu aktinskih filamenata, veže se na njihov sporo rastući minus kraj otežavajući tako depolarizaciju, te povezuje filamente u ortogonalnu mrežu. U cilju detaljnijeg proučavanja tog kompleksa, konstruiran je plazmid čijom bi se ekspresijom dobio fuzijski protein YFP-Arp3 u stanicama vrste Dictyostelium discoideum. Arp3 je podjedinica kompleksa Arp2/3, a YFP je fluorescentni protein koji omogučava lokalizaciju proteina u stanici, te se može koristiti za proučavanje kolokalizacije i interakcije proteina. Međutim, ekspresija fuzijskog proteina YFP-Arp3 bila je zakočena zbog za vrstu D. discoideum, nepovoljnih kodona u DNA sekvenci YFP-a. Da bi se prevazišao taj problem, mutirana je DNA sekvenca GFP-a koja sadrži povoljne kodone za vrstu D. discoideum, u novu sekvencu čijim prepisivanja i translacijom nastaje YFP. Taj protein ima kodone prilagođene vrsti D. discoideum i uspiješno se eksprimira u njihovim stanicama, te je nazvan DYFP (Dictyostelium YFP).

Arp2/3; aktin; žuti fluorescentni protein; Dictyostelium

nije evidentirano