hrvatski

Uloga herpesvirusnih gena u izbjegavanju imunološkog nadzora posredovanog limfocitima T i NK-stanicama in vivo

Cilj istraživanja: Ispitati ulogu herpesvirusnih (citomegalovirusnih) gena u izbjegavanju imunološkog nadzora posredovanog limfocitima T i NK-stanicama. Materijal i metode: Rekombinante mišjeg citomegalovirusa (MCMV) s delecijom pojedinih imunomodulacijskih gena (m04, m06 ili m152 gena) testirali smo u različitim mišjim sojevima (BALB/c, C57BL/6, A/J, DBA/2, nu/nu BALB/c, BALB.B6-Cmv1r, intra-NK-kompleks (intra-NKC) rekombinantni miševi). Koristili smo dva protokola infekcije citomegalovirusom: intraperitonealna infekcija miševa pročišćenim virusima ili intravensko injiciranje inficiranih mišjih embrionalnih fibroblasta. Miševima smo depletirali NK-stanice ili smo ih ostavili netretirane, te smo ih žrtvovali 3. dana poslije infekcije. Protočnim citometrom pomoću NKG2D tetramera smo analizirali ispoljavanje liganda za NKG2D na inficiranim stanicama. Rezultati: m152-delecijska mutanta osjetljivija je na nadzor posredovan CD8+ limfocitima T u usporedbi s revertantnim i divljim tipom MCMV-a (Krmpotić i sur. J Exp Med 1999 ; 190:1285). Sličan učinak ima i delecija m06 gena čiji produkt snažno narušava MHC-I ekspresiju, dok delecija m04 gena nema utjecaja na osjetljivost virusa na CD8+ limfocite T. Suprotno očekivanju, delecija m152 gena čini virus osjetljivijim i na nadzor posredovan NK-stanicama. Delecija m04 gena također čini virus osjetljivijim na nadzor posredovan NK-stanicama, dok delecija m06 gena ne utječe na osjetljivost virusa na NK-stanice. Učinak m152 gena na NK-stanice ovisan je o mišjem soju (u BALB/c i DBA/2 miševa NK-stanice su inhibirane djelovanjem m152 gena, dok su C57BL/6 i BALB.B6-Cmv1r miševi rezistentni na taj inhibicijski učinak). Pomoću intra-NKC rekombinantnih miševa ustanovili smo da je gen koji određuje osjetljivost/otpornost na NK-inhibiciju posredovanu m152 genom smješten u NK-kompleksu unutar lokusa Cd94, Ly49 i Cmv1. Injiciranjem inficiranih fibroblasta rezistentnog mišjeg soja u osjetljivi soj pokazali smo da je za inhibicijski učinak m152 gena važan i ligand na ciljnoj stanici. Protočnim citometrom pomoću NKG2D tetramera smo ustanovili da je molekula na inficiranim stanicama čije ispoljavanje modulira m152/gp40 ligand NKG2D receptora i da se najvjerojatnije radi o molekuli H60. Zaključak: Ovim radom po prvi put je pokazano da jedan imunomodulacijski gen (m152 gen MCMV-a) može omogućiti virusu izbjegavanje i CD8+ limfocita T i NK-stanica.

MCMV; m152; NKG2D; limfociti T; stanice NK

nije evidentirano