hrvatski

Uloga limfocita T i B u diferencijaciji osteoklasta

Cilj ove studije bio je istražiti djelovanje limfocita T i B na osteoklastogenezu, na mišjem modelu, odstranjivanjem pojedinih populacija limfocita in vivo. Ravnoteža osteoprotektivnih i osteoresorptivnih čimbenika u koštanom mikrookolišu narušena je odstranjivanjem limfocita, a učinak na osteoklastogenezu dalje je proučavan u uvjetima in vitro. Pojedine populacije limfocita T i B, te subpopulacije limfocita T, odstranjivane su intraperitonealnim uštrcavanjem monoklonskih protutijela specifičnih za odgovarajuće limfocitne biljege po mišu. Uspješnost odstranjivanja limfocita potvrđena je protočnocitometrijski. Broj razvijenih osteoklasta praćen je u sedmodnevnim kulturama stanica koštane srži potaknutim 1, 25-(OH)2 vitaminom D3 ili čimbenicima: rekombinantni mišji (rm)RANK-L (ligand aktivacijskog receptora jezgrinog čimbenika kB) i rmM-CSF (monocitno/makrofagni čimbenik poticanja kolonija), te u sedmodnevnim kulturama stanica slezene potaknutim čimbenicima rmRANK-L i rmM-CSF. Osteoklasti su dokazani histokemijskim bojenjem kisele fosfataze otporne na tartarat i autoradiografskim označavanjem kalcitoninskih receptora. Broj osteoblastnih kolonija utvrđen je histokemijskim bojenjem alkalne fosfataze u desetodnevnim kulturama koštane srži potaknutim aksorbinskom kiselinom, deksametazonom i beta-glicerofosfatom. Uloga GM-CSF (granulocitno/makrofagni CSF) i IFN (interferon)-gama analizirana je dodavanjem neutralizacijskih protutijela na te citokine u kulture koštane srži. Uloga prostaglandina istraživana je dodavanjem indometacina u kulture koštane srži i mjerenjem koncentracije prostaglandina E2 u nadtalozima kultura postupkom radioimunoeseja. U petodnevnim kulturama koštane srži analiziran je izražaj gena postupkom RT-PCR (obrnuto prepisivanje-polimerazina lančana reakcija) za osteoprotektivne citokine (GM-CSF i IFN-gama), osteoresorptivne citokine (IL (interleukin)-1alfa, IL-1beta, IL-6 i TNF (čimbenik nekroze tumora)-alfa), "inducibilnu" G/H-sintetazu, te citokine sustava RANK-L/RANK/OPG (osteoprotegerin). Važnost IL-1 i IL-6 za djelovanje odstranjivanja limfocita na osteoklastogenezu istraživan je uzgojem osteoklasta u kulturama koštane srži miševa s izbačenim genom za IL-1-receptor tip 1 i za IL-6. Odstranjivanje limfocita T potiče osteoklastogenezu u kulturama koštane srži potaknutim 1, 25-(OH)2 vitaminom D3, dok odstranjivanje limfocita B ne mijenja broj osteoklasta. Odstranjivanje limfocita T CD4+ ima snažniji osteoklastogenetski učinak od odstranjivanja limfocita T CD8+, a odstranjivanje obiju subpopulacija limfocita T aditivno povećava broj osteoklasta. Nasuprot tome, odstranjivanje limfocita T ne mijenja broj razvijenih osteoklasta u kulturama stanica slezene i koštane srži potaknutim stromalnim čimbenicima rmRANK-L i rmM-CSF. Čini se da je učinak odstranjivanja limfocita T posredovan prostaglandinom E2, zbog toga što je koncentracija prostaglandina E2 oko 6 puta veća u nadtalozima kultura koštane srži miševa obrađenih antilimfocitnim protutijelima u odnosu na kontrolne kulture, a dodavanje indometacina poništava poticajan učinak odstranjivanja limfocita T na osteoklastogenezu. Pri analizi postupkom RT-PCR pokazan je dvostruko jači izražaj gena za RANK-L i kočenje izražaja gena za OPG u kulturama koštane srži potaknutim 1, 25-(OH)2 vitaminom D3 miševa kojima su odstranjeni limfociti T. Bez obzira na jači izražaj gena za IL-1a i IL-6 u kulturama koštane srži miševa obrađenih antilimfocitnim protutijelima, broj razvijenih osteoklasta nakon odstranjivanja limfocita T nije se značajno razlikovao u kulturama koštane srži miševa s izbačenim genom za IL-1-receptor tip 1 i za IL-6 u odnosu na kulture miševa divljeg soja. Dodavanje protutijela anti-GM-CSF povećalo je broj osteoklasta u kulturama koštane srži kontrolnih miševa na broj sličan onome u kulturama miševa obrađenih antilimfocitnim protutijelima, a dodavanje protutijela anti-IFN-g nije značajno mijenjalo broj razvijenih osteoklasta. Međutim, osjetljivim postupkom RT-PCR nije se mogao utvrditi izražaj gena za GM-CSF, pa nije vjerojatno da on ima važnu ulogu u kočenju osteoklastogeneze limfocitima T. Odstranjivanje limfocita T potiče razvoj osteoklasta u kulturama koštane srži potaknutim 1, 25-(OH)2 vitaminom D3 putem pojačane sinteze prostaglandina E2. Prostaglandin E2 susljedno uzrokuje recipročne promjene u izražaju čimbenika RANK-L i OPG u stromalnim stanicama koštane srži. Limfociti T ne djeluju na osteoklastogenezu putem regulacije osteoprotektivnih (GM-CSF i IFN-gama) i osteoresorptivnih citokina (IL-1, IL-6 i TNF-a), nego djelovanjem na osteoklastogenetski potencijal stromalnih stanica koštane srži, regulacijom omjera RANK-L/OPG.

limfociti; osteoklasti; citokini; diferencijacija

nije evidentirano