hrvatski

KARAKTERIZACIJA INTERAKCIJE HUMANIH PROTEINA SPRTN I p97 METODOM SUPROČIŠĆAVANJA AFINITETNOM KROMATOGRAFIJOM

Križne veze DNA i proteina (engl. DNA-protein crosslinks, DPCs) česta su vrsta oštećenja DNA koja nastaju kovalentnim i ireverzibilnim vezanjem proteina na DNA. Riječ je o velikim lezijama koje sterički ometaju procese koji se odvijaju na DNA poput replikacije, transkripcije, rekombinacije i popravka. Nepopravljeni DPC-ovi narušavaju stabilnost genetičkog materijala i funkciju stanica. U nedavno otkrivenom proteolitičkom putu popravka križnih veza DNA i proteina sudjeluju proteaza Wss1 u kvascu i SPRTN u metazoama. Gen koji kodira za SPRTN esencijalan je u sisavaca te mutacijama uzrokuje SPARTAN ili Ruijs-Aalfs sindrom karakterizaran preuranjenim starenjem, kromosomskom nestabilnošću i karcinomom jetre u mladoj dobi. SPRTN stupa u interakciju s p97/VCP AAA ATPazom koja potencijalno sudjeluje u proteolitičkom putu popravka. U ovom radu pripravljeni su konstrukti različitih duljina humanih proteina SPRTN i p97 koji su prekomjerno eksprimirani u bakteriji Escherichia coli, pročišćeni afinitetnom kromatografijom i prema potrebi gel-filtracijom. Potom je određeno njihovo mjesto interakcije metodom supročišćavanja afinitetnom kromatografijom. Rezultati ukazuju na to da su SHP motiv SPRTN-a i N-D1 domene p97 ključne za interakciju između SPRTN i p97 proteina. Dobiveni rezultati biti će iskorišteni za daljnju strukturnu analizu SPRTN:p97 kompleksa metodom rendgenske kristalografije i krio-elektronske mikroskopije.

križne veze DNA i proteina, SPRTN proteaza, p97 ATPaza, popravak DNA, supročišćavanje afinitetnom kromatografijom

nije evidentirano