hrvatski

Imunokemijska karakterizacija protutijela za membranski protein Na+/K+-ATPazu u tkivima ribe zebrice (Danio rerio)

Riba zebrica, Danio rerio (Hamilton, 1822), modelni je organizam koji se danas sve više koristi u ekotoksikološkim i biomedicinskim istraživanjima. Kao i drugi kralježnjaci, ribe svoju osmotsku homeostazu organizma održavaju radi normalnog funkcioniranja fizioloških procesa. Natrij-kalij ATP-aza fiziološki je važan integralni membranski protein čija lokalizacija i razvojno-uvjetovana ekspresija u tkivima zebrice još uvijek nije u potpunosti istražena. Imunohistokemija je česta metoda istraživanja lokalizacije proteina u tkivima/stanicama sisavaca, kod koje postupak/odabir fiksacije može doprinijeti maskiranju epitopa te onemogućiti protutijelima uspješno vezanje za svoje specifično mjesto. No, korištenje optimalnih metoda otkrivanja epitopa može značajno poboljšati vezanje korištenog protutijela. Stoga je cilj ovog istraživanja bio, upotrebom različitih metoda otkrivanja epitopa, utvrditi optimalne uvjete za korištenje a6F protutijela u imunofluorescencijskoj analizi kriopreparata ribe zebrice. Koristeći utvrđene optimalne uvjete cilj je bio istražiti postojanje novih lokalizacija i postojanje razvojno-uvjetovane ekspresije proteina Na+/K+-ATP-aze tijekom prvih 120 h embrionalnog razvoja ribe zebrice. Istraživanje je pokazalo da je obrada kriopreparata deterdžentom SDS (engl. sodium dodecyl sulphate) uz razrjeđenje 1:400 protutijela a6F optimalan uvjet za određivanje lokalizacije proteina Na+/K+-ATP-aze u ribi zebrici. Konačno, otkriveno je da je lokalizacija α1 podjedinice natrij-kalij ATP-aze tkivno specifična te je da je njezina ekspresija razvojno- i zonski-uvjetovana.

kriopreparati ; imunofluorescencijska analiza ; natrij-kalij ATP-aza ; zebrica

nije evidentirano