hrvatski

Optimizacija metoda detekcije proteina F-aktina u zebrici, Danio rerio (Hamilton, 1822)

Riba zebrica, Danio rerio (Hamilton, 1822) je u proteklom desetljeću postala važan modelni organizam u biomedicinskim istraživanjima. Zbog tehničkih izazova u pripremi histoloških kriopreparata, većina dosadašnjih istraživanja lokalizacije/ekspresije proteina u zebrici je koristila parafinske i whole-mount preparate. Cilj ovog istraživanja bio je u embrijima/ličinkama ribe zebrice starosti 1.-5. dana poslije oplodnje (broj jedinki/skupini=20): 1) odrediti ključne čimbenike u pripremi tkiva zebrica za izradu kriopreparata očuvane strukture, 2) odrediti optimalni protokol za utvrđivanje lokalizacije/ekspresije fiziološki važnog unutarstaničnog proteina F-aktina upotrebom fluorescentno obojenog faloidina, 3) istražiti starosne razlike u ekspresiji F-aktina u mišićima ribe zebrice, i 4) istražiti upotrebljivost optimiziranog protokola za potrebe imunofluorescencijske analize membranskih proteina zebrice poput Na+/K+-ATPaze. Rezultati su pokazali najbolju kvalitetu kriopreparata debljine 8μm rezanih pri -20 °C nakon inkubacije uzoraka 1 h u 4 % paraformaldehidu (PFA) i smjesi 2, 5 % želatine/25 % saharoze. Fluorescencijskom analizom mikroskopskih slika mišića glave i trupa jedinki zebrice utvrđeno je da inkubacija uzoraka 1 h u 4 %PFA omogućuje optimalno vezanje faloidina za protein F-aktin. Daljnjim (imuno)fluorescencijskim analizama utvrđena je starosno-ovisna ekspresija F-aktina u mišićima trupa zebrice te mogućnost upotrebe istog protokola za određivanje lokalizacije/ekspresije membranskog proteina zebrice Na+/K+-ATPaze. Stoga, ovaj optimizirani imuno/histokemijski protokol za pripremu/obradu kriopreparata predstavlja podlogu za istraživanja lokalizacije/ekspresije različitih (ne)membranskih proteina zebrice.

kriopreparati ; (imuno)fluorescencijska analiza , aktin ; natrij-kalij ATP-aza ; zebrica

nije evidentirano