hrvatski

Test neutralizacije SARS-CoV-2 kao ključ za uvođenje seroterapije u liječenju COVID-19 u Hrvatskoj

Plazma preboljelih se upotrebljava danas, kao i više puta u povijesti u razdobljima epidemija, da bi se liječili pacijenti oboljeli uslijed zaraze novim i nepoznatim patogenima. Iako se takav oblik terapije generalno smatra korisnim i učinkovitim na temelju niza opisanih primjera, znanstvena i medicinska zajednica još uvijek nema definitivan dokaz njezine učinkovitosti na temelju pažljivo dizajniranih i randomiziranih kliničkih studija. Kad su takve provedene u nekoliko navrata, nisu uspjele pokazati korist plazme u odnosu na placebo. Razlozi leže većinom u specifčnim okolnostima u kojima se plazma koristi. U epidemijskim vremenima borimo se protiv nepoznatog uzročnika, kada ne postoje reagensi, standardi, i metodologija za ispitivanje djelotvornosti antitijela, ili se tek razvijaju. Stoga se rezultati dobiveni različitim, nestandardiziranim testovima ne mogu adekvatno procjenjivati i otežavaju uspredbe kako unutar jedne studije, tako posebice među različitima. Protekle dvije godine bile su period široke i obilate primjene plazme u liječenju pacijenata s COVID-19, ali do sada dostupni rezultati različitih studija nisu međusobno usporedivi zbog razlika u načinima procjene količine i kvalitete antitijela u plazmama korištenim za liječenje, od kojih niti jedna metoda nije kalibrirana prema međunarodnom standardu. U predavanju će biti opisan pristup uspostavi karakterizacije antitijela u epidemijskim vremenima, na način koji omogućava iskazivanje svih rezultata testiranja u jedinicama međunarodnog standarda za antitijela na SARS-CoV-2 virus, onog trenutka kad on postane dostapan znanstvenoj i stručnoj javnosti. Uspostavili smo test neutralizacije divljeg tipa virusa SARS-CoV-2 (BSL3 patogen), kao najrelevantniji u procjeni zaštitne moći antitijela. Da bi se osigurala maksimalna ponovljivost, koristili smo sistem izrade banki svih bioloških komponenti: SARS-CoV-2 virusa, stanica i vlastitog (in-house) standarda specifičnih antitijela. Upotreba vlastitog standarda za anti-SARS-CoV-2 antitijela i njegova kalibracija prema prvom WHO međunarodnom standard, čim je postao dostupan u proljeće 2021, omogućila je iskaz rezultata u međunarodno usporedivim jedinicama. Neutralizirajuća antitijela za SARS-CoV-2 virus u osoba koje su COVID-19 preboljele bila su u rasponu od 4 do 2869 mL–1 (0.55 to 3.46 log IU mL–1), i značajno su korelirala s težinom simptoma u razdoblju bolesti. Količina neutralizirajućih antitijela u oboljelih polagano opada odmakom vremena, u prosjeku 1.4 x u mjesec dana. Inaktivacija temperaturno-labilnih komponenti seruma zagrijavanjem uzrokovala je pad neutralizirajuće moći od 2.3x, ukazujući da antitijela induciraju aktivnost temperaturno labilnog komplementa i regrutiraju i proteine komplementa u borbi protiv virusa. U Hrvatskoj je prikupljanje konvalescentne plazme započelo u srpnju 2020 u Hrvatskom zavodu za transfuzijsku medicinu, uspostava metodologije za karakterizaciju antitijela u rujnu 2020, a prve doze plazme za liječenje su upotrebljene u prosincu 2020. Do danas je iz tog transfuzijskog centra izdano oko 700 doza COVID-19 konvalescentne plazme, kojima je liječeno oko 130 pacijenata. 99% svih pripravaka korišteno je u liječenju bolesnika s hematološkim malignitetima, čiji je imunološki sustav značajno oslabljen uslijed osnovne bolesti i njenog liječenja. Pacijenti bez vlastitih antitijela u krvi bili su pogodan eksperimentalni sustav u kojem smo pokazali uspješnost transfuzije neutralizirajućih antitijela jednom ili više doza konvalescentne plazme, koje sadrže minimalno 35 IU mL–1.. Istraživanje je rezultat zajedničke suradnje Centra za istraživanje i prijenos znanja u biotehnologiji Sveučilišta u Zagrebu, Hrvatskog zavoda za transfuzijsku medicinu, te Klinike za infektivne bolesti dr. Fran Mihaljević. Financirano je sredstvima Hrvatske zaklade za znanost (projekt IP-CORONA-04-2053) i Europskog fonda za regionalni razvoj (projekt KK.01.1.1.01.0006 “Jačanje kapaciteta CERVirVac-a za istraživanja u virusnoj imunologiji i vakcinologiji).

passive antibody therapy ; convalescent plasma ; COVID-19 ; SARS-CoV-2 ; wild-type virus neutralization assay

nije evidentirano