hrvatski

POBOLJŠANJE POSTUPKA TRANSFORMACIJE KVASCA Scheffersomyces stipitis ELEKTROPORACIJOM

Nekonvencionalni kvasac Scheffersomyces stipitis, izoliran je iz trulećeg drva i larvi insekata koji nastanjuju drvo. S. stipitis ima jednu od najviših sposobnosti izravne fermentacije ksiloze u etanol što je posebno zanimljivo pri proizvodnji bioetanola iz lignoceluloznih sirovina. Ovaj kvasac je prototrof, rezistentan je na antibiotike koji se često koriste kao selektivni biljezi pri transformaciji, nisu razvijeni visokoefikasni postupci za transformaciju te mu efikasnost transformacije iznosi 1∙103 transformanata μg-1. Cilj ovog rada bio je modificirati protokol za elektroporaciju kako bi se postigla viša efikasnost transformacije te odrediti uspješnost genskog ciljanja mehanizmom rekombinacije krajevi- van. Modificirani protokol za elektroporaciju omogućio je postizanje efikasnosti transformacije više od 1∙105 transformanata μg-1. Uspješnost genskog ciljanja, u sustavu u kojem se istraživala zamjena gena SsURA3 genom koji nosi rezistenciju na higromicin, koji se nalazi na disrupcijskoj kazeti, procijenjena je na manje od 0, 2 %. Dodatno, istražena je i mogućnost primjene CRISPR/Cas sustava kako bi se povećala uspješnosti genskog ciljanju u kvascu S.stipitis.

kvasac Scheffersomyces stipitis, transformacija, elektroporacija, gensko ciljanje, sustav CRISPR/Cas

nije evidentirano