hrvatski

Ekspresija gena cirkadijanog ritma kod nemodelnih kukaca

Usklađivanje cirkadijanog ritma s okolišem preduvjet je reguliranja fizioloških i metaboličkih procesa, a time i preduvjet preživljavanja i prilagodbi različitih organizama. Istraživanja od kojih je većina provedena na modelnom organizmu, mušici Drosophila melanogaster, ukazala su na konzerviranost molekularnih mehanizama koji reguliraju cirkadijani ritam. Njihov ključni dio je autoinhibicijska regulacija transkripcije gena čiji produkti reguliraju ekspresiju drugih gena cirkadijanog ritma.Transkripcijsko-translacijsku povratnu spregu potiču i vode geni Clk i Cyc te geni Per i Tim, čiji produkti stvaraju dimere [2]. Stoga je cilj ovog istraživanja bio razviti metodu za detekciju ekspresije gena Clk i Per kod nemodelnih kukaca. Odabrane vrste (Bezzia flavicornis, Simulium sp., Wiedemannia ouedorum, Antocha vitripennis, Simulium velutinum i Ecdyonurus starmachi) uzete su iz arhivskih zbirki u kojima su bile pohranjene u alkoholu. Za analizu ekspresije gena korištena je metoda RT-qPCR pri čemu je Rpl32 odabran kao endogena kontrola [3]. Kontrolni uzorak bio je izolat RNA iz mušice Drosophila melanogaster na temelju čijeg genoma su i odabrane specifične početnice korištene za amplifikaciju odabranih gena [4]. Rezultati su pokazali da je gene Clk i Per moguće umnožiti u uzorcima nemodelnih kukaca vrsta Simulium velutinum i Ecdyonurus starmachi korištenjem početnica specifičnih za evolucijski očuvane gene čija je sekvenca određena prema genomu srodnog modelnog organizma. Dobiveni rezultati ukazuju na mogućnost analize ekspresije gena cirkadijanog ritma kod nemodelnih organizama kao načina procjene utjecaja zagađenja urbanih potoka na molekularnoj razini.

makrofauna bentosa ; cirkadijani ritam ; ekspresija gena

nije evidentirano