hrvatski

Razvoj i validacija RP-HPLC metode za određivanje trijodtironina (T3) i tiroksina (T4) u biološkom uzorku

Procjenjuje se da u svijetu 250 milijuna ljudi boluje od raznih bolesti štitne žlijezde koje su često autoimunog podrijetla. Kompleksnost patofiziologije i neadekvatni odgovor na klasičnu terapiju tiroksinom, otvara potrebu za novim farmaceutskim pripravcima, kao što je pulverizirani pripravak nadbubrežne žlijezde svinje u kojem je potrebno odrediti količinu prisutnih hormona. Cilj ovog rada je razviti brzu i pouzdanu RP-HPLC (engl. Reversed-Phase High Performance Liquid Chromatography) metodu za kvantitativno određivanje hormona štitnjače trijodtironina (T3) i tiroksina (T4) u biološkom uzorku. HPLC je visoko učinkovita tekućinska kromatografija, a ovisno o relativnoj polarnosti pokretne i nepokretne faze razlikujemo kromatografiju normalnih faza i kromatografiju obrnutih faza (RP-HPLC). HPLC se danas rutinski koristi u zdravstvenim, znanstvenim laboratorijima te industriji za razdvajanje i identifikaciju različitih biološki aktivnih spojeva, zbog svoje preciznosti, specifičnosti i brze analize. Svaka analitička metoda mora se validirati tj. mora se dokazati da je metoda podesna i pouzdana za primjenu. Metoda je validirana prema smjernicama Međunarodne konferencije o harmonizaciji (engl. International Conference on Harmonization, ICH). Određena je specifičnost, točnost, područje linearnosti metode te limit detekcije i kvantifikacije ispitivanih spojeva. Kvantifikacija je provedena pomoću internog standarda (IS), antrakinona. Korištena je C18 RP-HPLC kolona, uz detekciju na UV-Vis detektoru, λ=240nm. Mobilna faze se sastojala od metanola:H2O:TFA (65:35:0, 025%). Razvijena metoda je visoko specifična i točna, s rasponima analitičkog prinosa 103, 29-116, 81%. Metoda je linearna u ispitivanom koncentracijskom području (1, 25-20μg/mL). Intra i inter-testna preciznost je bila visoka pri čemu je RSD za T3 i T4 te IS bio niži od 5%. Autoimune bolesti te poremećaji štitnjače, unatoč pandemiji COVID-19, ne gube na važnosti, naprotiv potrebno je posebnu pažnju obratiti na tu skupinu ljudi kod dizajna i razvoja različitih cjepiva. HPLC je često korištena analitička metoda kod razvoja različitih cjepiva, kada je potrebno kvantitativno analizirati sastav cjepiva s obzirom na količinu antigena, adjuvanata i drugih molekula u formulaciji. Rad je napravljen u okviru projekta Sinteza supramolekulskih samo-udruženih nanostruktura za izgradnju naprednih funkcionalnih materijala“ (SUPeRNANO, IP-2018-01-6910) kojega financira Hrvatska zaklada za znanost.

hormoni, razvoj metode, svinjska nadbubrežna žljezda

nije evidentirano